Plik agar cetrymidowy o cetrymid jest selektywną stałą pożywką hodowlaną przeznaczoną do izolacji Pseudomonas aeruginosa. Polega na uwydatnieniu produkcji charakterystycznych dla tego gatunku barwników i powstał z modyfikacji agaru Tech, stworzonego przez King, Ward i Raney..
Oryginalna formuła zawierała sole chlorku magnezu, siarczanu potasu, trzustkowe trawienie żelatyny oraz agar-agar. Modyfikacja wzoru polegała na dodaniu cetrymidu (bromku cetylotrimetyloamoniowego) i glicerolu.
Agar cetrymidowy jest przydatny do badań mikrobiologicznych próbek, w których występuje Pseudomonas aeruginosa. Należy zauważyć, że ta bakteria ma ogromne znaczenie, ponieważ chociaż jest częścią normalnej mikrobioty środowiskowej, często zachowuje się jak oportunistyczny patogen.
Dlatego jednym z najczęstszych problemów wywoływanych przez ten zarazek są zakażenia szpitalne, czyli takie, które występują w środowisku szpitalnym, atakując pacjentów z osłabionym układem odpornościowym..
Z drugiej strony, ze względu na powinowactwo, jakie ten mikroorganizm ma z wilgocią, najbardziej wrażliwymi celami skażenia są: sprzęt do wspomaganego oddychania, leki, nebulizatory, źródła wody, klimatyzatory, środki dezynfekujące, roztwory mydła, roztwory do iniekcji, otwarte rany, cewniki, rurki moczowe m.in..
W tym sensie agar cetrymidowy jest przydatny do przeprowadzania kontroli mikrobiologicznych i hodowli wspomnianych wcześniej elementów..
Indeks artykułów
Agar Cetrimide opiera się na zdolności podłoża do promowania wzrostu P. aeruginosa, stymulują produkcję swoich pigmentów, a tym samym hamują rozwój innych mikroorganizmów.
Właściwości te wynikają z funkcji każdego z jego składników. Obecny pepton żelatyny służy jako źródło azotu, witamin i minerałów. Glicerol lub gliceryna działa jako źródło węgla.
Ze swojej strony cetrymid (bromek cetylotrimetyloamoniowy) jest substancją hamującą rozwój bakterii innych niż P. aeruginosa, w tym inne gatunki należące do tego samego rodzaju.
Zahamowanie występuje, ponieważ cetramid działa jako detergent kationowy, powodując destabilizację błony plazmatycznej większości bakterii, z wyjątkiem P. aeruginosa i kilka innych, którym udaje się przetrwać.
Z drugiej strony zawiera chlorek magnezu i siarczan potasu. Związki te stymulują ekspresję fenotypową związaną ze zdolnością do Pseudomonas aeruginosa do produkcji różnych pigmentów, w tym: piocyjaniny, pyowerdyny, pyorrubiny, pyomelaniny i fluoresceiny. Wreszcie zawiera agar-agar, który nadaje mu stałą konsystencję.
Interpretację wzrostu uzyskanego w tym agarze przeprowadza się w następujący sposób:
Przypuszczalnym wynikiem obecności tej bakterii we wspomnianej próbce jest obserwacja okrągłych, gładkich kolonii o regularnych krawędziach, z produkcją niebiesko-zielonkawych, zielonych, brązowych lub czerwonawych pigmentów oraz wydzielaniem zapachu owocowego (aminoacetofenon)..
Ponadto wskazuje na P. aeruginosa obserwacja jasnego zielonkawo-żółtego pigmentu na koloniach po wystawieniu płytki na działanie światła ultrafioletowego.
Należy zauważyć, że każdy obserwowany kolor wynika z produkcji określonego pigmentu. Pigment niebiesko-zielony odpowiada wytwarzaniu piocyjaniny, zielony pyoverdin, czerwonawy piorrubiny, brązowy pyomelaniny, a jasnożółto-zielony fluoresceinie w świetle UV..
Odważyć 43 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w wodzie destylowanej. Dodaj 10 ml gliceryny. Doprowadzić mieszaninę do źródła ciepła. Gotować przez kilka minut, aż do całkowitego rozpuszczenia.
Autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut. Odstawić i podawać na sterylnych szalkach Petriego, gdy temperatura wynosi około 50 ° C.
Zestalić, odwrócić, uporządkować w płytkach i przechowywać w lodówce do momentu użycia. Aby wysiać płytki z agarem cetrimidowym, należy je wcześniej wyjąć z lodówki i pozostawić do ogrzania do temperatury pokojowej..
Końcowe pH pożywki musi wynosić 7,2 ± 0,2.
Odwodnione podłoże ma kolor beżowy, a preparat matowobiały.
Na agarze cetrymidowym można posadzić wszystkie rodzaje próbek, w których występuje Pseudomonas aeruginosa. Dlatego jest przydatny we wszystkich obszarach mikrobiologii (środowiskowa, przemysłowa, kliniczna, woda i żywność)..
Bardzo ważna jest analiza środowiska szpitalnego, a tym samym możliwość zastosowania środków naprawczych, ponieważ mikroorganizm ten dociera do pacjentów za pośrednictwem skażonego sprzętu, leków, roztworów i materiałów eksploatacyjnych, z których korzysta pacjent..
W ten sposób drobnoustrój może zakażać dolne drogi oddechowe, drogi moczowe i rany pacjentów z obniżoną odpornością..
Liczba kolonii P. aeruginosa w testach granicznych drobnoustrojów.
Jako kulturę podstawową można zastosować agar cetrymidowy. Płytkę zaszczepia się na jednej z jej krawędzi i stamtąd jest rozprowadzana przez wyczerpanie na pozostałą część płytki. Płynne próbki można zaszczepić na powierzchni szpatułką drigalskiego.
Płytki inkubuje się w warunkach tlenowych w 37 ° C przez 24 godziny inkubacji.
-Niewielki procent szczepów Pseudomonas aeruginosas nie wytwarzają piocyjaniny, więc można zinterpretować fałszywie negatywny wynik.
-Niektóre klinicznie ważne gatunki Pseudomonas są w tym środowisku zahamowane.
-Pomimo przestrzegania cech opisanych dla Pseudomonas aeruginosa, muszą być potwierdzone dodatkowym dowodem tożsamości. Testem, którego nie można pominąć, jest test oksydazy, musi on dać wynik pozytywny.
-Niektóre Enterobacteriaceae mogą rosnąć na tym podłożu i wytwarzać żółty pigment, ale różni się on od Pseudomonas aeruginosa pod tym względem, że gdy płytkę poddaje się działaniu światła ultrafioletowego, nie ma fluorescencji.
-Serratia marcescens rozwija się i wytwarza różowy pigment.
-Jeśli płytki wysiane agarem cetrymidowym są wystawiane na pewien czas w temperaturze pokojowej, szczepy P. aeruginosa mogą utracić fluorescencję obserwowaną w świetle UV, jednak właściwość ta jest odzyskiwana, jeśli jest ponownie inkubowana w temperaturze 37 ° C.
Aby przeanalizować dobre działanie agaru cetrimidowego, można zastosować szczepy kontrolne, takie jak: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Oczekiwane rezultaty to:
Jeszcze bez komentarzy