Plik agar z mąką kukurydzianą jest stałą pożywką hodowlaną o niskiej wartości odżywczej, przydatną do subkultywacji niektórych grzybów oraz do demonstrowania chlamydospor w szczepach kompleksu Candida albicans. W języku angielskim jest znany jako Corn Meal Agar.
Konwencjonalne podłoże z mąką kukurydzianą ma bardzo prosty skład, zawiera mąkę kukurydzianą, agar-agar i wodę. Ze względu na niski poziom odżywienia jest idealny do stosowania w utrzymaniu szczepów grzybów przez umiarkowany okres, zwłaszcza czarnych..
Sporulacja kompleksu Candida albicans w tej pożywce jest to korzystne, jeśli podczas przygotowywania agaru dodaje się 1% Tween 80. Powstawanie chlamydospor jest charakterystyczne dla tego gatunku i praktycznie jedynego, który dotyka ludzi..
Istnieją inne gatunki, które tworzą chlamydospory, ale jest mało prawdopodobne, aby miały one wpływ na ludzi, na przykład Candida australis, obecny w odchodach pingwinów lub C. clausenii, który jest rzadko spotykanym saprofitem. Podobnie wyjątkowo gatunek C. stellatoidea Y C. tropicalis może je uformować.
Z drugiej strony dodatek glukozy do pożywki z mąki kukurydzianej sprzyja tworzeniu się pigmentów w szczepach Trichophytom rubrum.
Należy zauważyć, że istnieją grzyby, które nie tworzą strzępek ani pseudostrzępek w agarze z mąki kukurydzianej, takie jak Cryptococcus neoformans, odróżniając się od innych gatunków.
Agar z mąką kukurydzianą może być domowej roboty w laboratorium lub można również stosować pożywki komercyjne..
Indeks artykułów
Mąka kukurydziana jest substratem, agar jest środkiem zestalającym, a woda jest rozpuszczalnikiem..
Agar z mąką kukurydzianą można uzupełnić Tween 80 (monooleinian sorbitanu lub polisorbat poliester 80). Związek ten zmniejsza napięcie powierzchniowe medium ze względu na swoje właściwości emulgujące.
Tworzy również wrogie środowisko, które hamuje nadmierne namnażanie się komórek i stymuluje wzrost strzępek, sprzyjając również produkcji chlamydospor; ten ostatni rozważał struktury oporu. Taka struktura pomaga w identyfikacji gatunku Candida albicans.
Ze swojej strony glukoza w tym podłożu zwiększa zdolność niektórych grzybów do tworzenia pigmentów..
Należy zauważyć, że pożywka glukozowa mąka kukurydziana nie służy do wykazania chlamydospor w cKompleks Candida albicans.
Odważ 47 g żółtej mąki kukurydzianej i rozpuść w 500 ml wody destylowanej. Podgrzać do 60 ºC, mieszając preparat przez około 1 godzinę. Następnie przefiltrować przez kawałek gazy i waty, opcjonalnie można je ponownie przefiltrować przepuszczając preparat przez bibułę filtracyjną Whatman nr 2.
Uzupełnić objętość do 1000 ml wodą destylowaną. Dodaj 17 g agaru, podgrzewaj do rozpuszczenia. Autoklawuj przez 15 minut w 121 ° C.
Podawać na sterylnych szalkach Petriego. Przechowywać w lodówce.
Kolor przygotowanego podłoża jest białawy o grudkowatym wyglądzie.
Jeżeli chcesz do opisanego powyżej preparatu przygotować mąkę kukurydzianą z glukozą, dodaj 10 g glukozy.
Odważyć 17 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Mieszaninę można podgrzać, delikatnie wstrząsając, aby całkowicie się rozpuściła. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C, przy 15 funtów, przez 15 minut.
Wlać do sterylnych szalek Petriego. Niech zestalą się. Odwrócić i przechowywać w lodówce do momentu użycia. Odpuszczać przed użyciem.
Wartość pH powinna wynosić 6,0 ± 0,2 w temperaturze 25 ° C.
Aby zachować zgodność z ISO 18416, agar z mąką kukurydzianą należy przygotować w następujący sposób:
Odważ 65 gramów na litr i dodaj 10 ml Tween 80. Podgrzewaj i gotuj przez kilka minut, aż się rozpuści, uważając, aby zbytnio się nie przegrzać. Sterylizuj w 121 ° C przez 15 minut.
Aby zwiększyć moc chromogenną kolonii Trichophyton rubrum i odróżnij je od T. mentagrophytes, Do oryginalnej receptury można dodać 0,2% glukozy. Nie musisz mieć Tween 80, ponieważ glukoza hamuje tworzenie się chlamydospor.
Do badania szczepów Candida służy głównie agar z mąką kukurydzianą, pomagający w ich identyfikacji poprzez charakterystyczną obserwację chlamydospor u gatunków albicans. Oznacza to, że użycie tego agaru służy jako pomocnicza metoda identyfikacji tych drożdży..
Na agarze mogą rozwijać się zarówno gatunki saprofityczne, jak i patogenne, ale każdy z nich tworzy charakterystyczne struktury grzybni. Na przykład gatunki z rodzaju Torulopsis nie wytwarzają grzybni i rozmnażają się tylko przez blastokonidia..
Podobnie gatunki Trichosporon i Geotrichum wytwarzają artroconidia na agarze z mąki kukurydzianej i czasami trudno jest odróżnić jeden od drugiego..
Arthroconidia z rodzaju Geotrichum wytwarzają przedłużenie strzępek przypominające kij hokejowy..
W identyfikacji przydatna jest również produkcja barwników na agarze z mąki kukurydzianej z dodatkiem glukozy Trichophytom rubrum.
Podejrzane kolonie Candida uzyskane w pożywce pierwotnej - agarze Sabourauda - z próbek klinicznych, kosmetyków, gleby, między innymi, są wyhodowane na agarze z mąki kukurydzianej. Pożywkę wysiewa się i inkubuje w 22 ° C przez 24 do 48 godzin. W razie potrzeby czas inkubacji można wydłużyć.
W tym celu agar z mąki kukurydzianej z Tween 80 należy zaszczepić techniką Dalmau. Metoda ta polega na pobraniu porcji podejrzanej rodziny platynową rączką i wykonaniu trzech równoległych cięć pośrodku, utrzymując rączkę pod kątem 45º. Kawałki muszą być oddalone od siebie o 1 cm.
Następnie na wysianych pasmach umieszcza się uprzednio podpalony przedmiot zakrywający, tak aby połowa była zakryta, a druga odsłonięta.
Inkubować wysiane płytki w 30 ° C przez 48-72 h, a następnie zbadać mikroskopowo przez szkiełko nakrywkowe..
W celu utrzymania szczepów wysiane i wyhodowane płytki są przechowywane w lodówce (od 4 do 8 ° C). W ten sposób mogą trwać kilka tygodni i służyć do celów dydaktycznych lub badawczych..
W celu kontroli sterylności płytkę inkubuje się bez inokulacji w temperaturze pokojowej, oczekuje się, że nie będzie wzrostu ani zmiany koloru.
Do kontroli jakości znane szczepy, takie jak: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.
Oczekiwane rezultaty to częściowe zahamowanie S. aureus Y E coli. Podczas gdy oczekuje się zadowalającego wzrostu w przypadku pozostałych szczepów.
Aspergillus niger rośnie z czarnymi i zarodnikującymi koloniami po około 5 dniach inkubacji.
Candida albicans kolonie drożdży z produkcją chlamydospor.
Saccharomyces cerevisiae wytwarzają duże komórki drożdży.
Na dnie płytki tworzy się żółty osad, którego nie należy mylić z koloniami..
Jeszcze bez komentarzy