Plik bulion tetrationianowy lub bulion TT jest selektywną płynną pożywką hodowlaną do wzbogacania i odzyskiwania szczepów z rodzaju Salmonella. Został stworzony przez Müellera, a później zmodyfikowany przez Kauffmanna, dlatego są tacy, którzy nazywają go bulionem Müeller-Kauffmann.
Oryginalna pożywka zawierała peptony proteozy, węglan wapnia i tiosiarczan sodu. Kauffmann dodał do niego sole żółciowe i stworzył kolejną modalność z jasnozielonym. Substancje te hamują wzrost bakterii z grupy coli, pozostawiając pożywkę wolną dla rozwoju bakterii chorobotwórczych, w tym przypadku Salmonella.
Modyfikacja była bardzo udana, ponieważ znacznie zwiększyła czułość podłoża. Z tego powodu jest obecnie przydatny do wyszukiwania Salmonellas w każdym typie próbki, ale szczególnie w stałych lub płynnych stolcach i pożywieniu..
Jego przygotowanie składa się z dwóch faz; komercyjne podłoże jest bazą do przygotowania bulionu tetrationianowego, a następnie, aby można było utworzyć tetrationian, dodaje się jodowany roztwór jodu w celu uzupełnienia pożywki.
Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) zaleca stosowanie bulionu tetrationowego z dodatkiem jasnozielonego do wzbogacania próbek Salmonelli, ponieważ jest bardziej selektywny niż bulion tetrationianowy i bulion selenitowy..
Zasadniczo bulion tetrationianowy jest idealny, gdy podejrzewa się obecność bakterii z rodzaju Salmonella w małych ilościach lub gdy są one nadużywane poprzez ekspozycję na substancje hamujące lub procesy przemysłowe, które minimalizują ich żywotność..
Indeks artykułów
Obecne peptony odpowiadają trzustkowemu trawieniu kazeiny i trawiennemu trawieniu tkanki zwierzęcej. Stanowią one źródło węgla, azotu i ogólnych składników odżywczych dla wzrostu bakterii..
Ze swojej strony tiosiarczan sodu reaguje z roztworem jodu, tworząc tetrationian. To hamuje rozwój bakterii z grupy coli i sprzyja rozwojowi bakterii, które zawierają enzym reduktazę tetrationianową, wśród nich rodzaj Salmonella, ale także Proteus.
Sole żółci działają również jako substancja hamująca dla większości bakterii Gram dodatnich i niektórych bakterii Gram ujemnych (pałeczki z grupy coli)..
Węglan wapnia absorbuje toksyczne substancje powstające w wyniku rozkładu tetrationianu, który tworzy kwas siarkowy. W tym sensie węglan wapnia neutralizuje kwasowość, utrzymując stabilne pH pożywki..
W przypadku modalności jasnozielonej substancja ta zwiększa selektywną moc bulionu tetrationianowego poprzez hamowanie mikroorganizmów innych niż z rodzaju Salmonella..
Ważyć:
Jodek potasu rozpuszcza się w około 5 ml jałowej wody destylowanej, a następnie stopniowo dodaje jod podczas podgrzewania mieszaniny. Po całkowitym rozpuszczeniu uzupełnić do kreski jałową wodą destylowaną do uzyskania końcowej objętości 20 ml..
Odważyć 46 gramów odwodnionej pożywki i zawiesić w 1 litrze sterylnej wody destylowanej. Mieszaj i podgrzewaj do całkowitego rozpuszczenia, może doprowadzić do wrzenia tylko przez kilka minut. Nie autoklawować. Podstawę pożywki pozostawia się do ostygnięcia do około 45 ° C i w tym czasie dodaje się 20 ml jodowanego roztworu..
Po dodaniu roztworu jodku do pożywki należy go natychmiast zużyć. Jeśli nie chcesz użyć całej mieszanki, wykonaj następujące czynności:
Do probówek rozlewa się 10 ml podłoża podstawowego, a tylko do tych, które mają być zaszczepione próbkami, dodaje się 0,2 ml roztworu jodowanego..
Te, które nie będą używane, można nadal przechowywać w lodówce, jednak ponieważ podłoże nie jest sterylizowane, najlepiej jest przygotować dokładnie taką ilość, jaka jest potrzebna..
Pożywka przed dodaniem roztworu jodu jodu jest mlecznobiała z białym osadem, a po dodaniu jest brązowa z gęstym osadem. Obserwowany osad jest normalny i odpowiada nierozpuszczalnemu węglanowi wapnia. Końcowe pH pożywki wynosi 8,4 ± 0,2.
Aby przygotować jasnozielony bulion tetrationianowy, przeprowadza się wszystkie opisane powyżej kroki, ale dodatkowo do mieszaniny zostanie dodane 10 ml jasnozielonego roztworu przygotowanego na 0,1%..
To rozwiązanie przygotowuje się w następujący sposób:
Odważyć 0,1 g jasnozielonego i zawiesić w 100 ml wody destylowanej. Podgrzać do wrzenia, aby uzyskać całkowite rozpuszczenie. Przechowywać w bursztynowej butelce.
W przypadku próbek kału (posiew kału) protokół jest następujący:
Zaszczep 1 g stałego stolca lub 1 ml płynnego stolca w probówce z 10 ml gotowego do użycia bulionu tetrationianowego. Energicznie wstrząsnąć i inkubować w warunkach tlenowych w 43 ° C przez 6-24 godziny.
Następnie weź 10 do 20 µl podwielokrotności bulionu i posiej hodowlę w selektywnej pożywce dla Salmonelli, takiej jak między innymi agar SS, agar XLD, agar jasnozielony, agar dojelitowy Hektoen..
Równolegle pożywki selektywne dla Salmonelli należy zaszczepić bezpośrednią próbką (kałem) bez wzbogacania. W przypadku wymazów z odbytu należy przenieść pobrany materiał do probówki i postępować zgodnie z powyższym opisem..
W przypadku próbek żywności odważ 10 g pokarmu stałego lub 10 ml pokarmu płynnego i zaszczep butelkę 100 ml gotowego do użycia bulionu tetrationianowego. Postępować w ten sam sposób, jak opisano powyżej, ale inkubować w 37 ° C.
Jak widać, relacja między próbką a bulionem zawsze będzie wynosić 1:10.
Do testowania pożywki hodowlanej można użyć znanych szczepów kontrolnych. Najczęściej używane są szczepy z certyfikatem ATCC.
Szczepy, których należy użyć, to Salmonella typhimurium ATCC 14028, Abony Salmonella DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Oczekuje się doskonałego rozwoju szczepów Salmonella, natomiast Escherichia coli może mieć słaby lub regularny rozwój, a szczepy Gram-dodatnie (Enterococcus i Staphylococcus) są częściowo lub całkowicie zahamowane.
-Ponieważ ta pożywka nie hamuje wzrostu Proteus, niektóre laboratoria stosują 40 mg / l nowobiocyny, aby uniknąć rozwoju tego szczepu drobnoustrojów. Antybiotyk należy dodać przed roztworem jodu jodu..
-Po przygotowaniu pożywki zawierającej roztwór jodu i jodu, inokulacja nie powinna zająć więcej niż 2 godziny..
-Podczas rozprowadzania pożywki w probówkach mieszaninę należy homogenizować w sposób ciągły, aby ponownie zawiesić utworzony osad..
-W przypadku mniej zanieczyszczonych próbek bulion tetrationianowy jest inkubowany w temperaturze 35–37 ° C, aw przypadku próbek silnie zanieczyszczonych zaleca się inkubację w temperaturze 43 ° C..
Jeszcze bez komentarzy