Plik BIGGY agar Jest to stałe, selektywne i zróżnicowane podłoże hodowlane. Został zaprojektowany, aby izolować i pomóc w identyfikacji głównych gatunków Candida. Jego nazwa BIGGY pochodzi od angielskiego akronimu Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Oryginalną formułę stworzył Nickerson, dlatego podłoże to znane jest również jako agar Nickerson. Obecnie zawiera ekstrakt drożdżowy, glicynę, dekstrozę, cytrynian amonu, cytrynian bizmutu, siarczyn sodu i agar..
Agar BIGGY został opracowany w celu różnicowania gatunków Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei i C. kefyr, ale inne gatunki również rosną podobnie Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum i Saccharomyces cerevisiae.
Charakteryzuje się dobrą czułością i specyficznością, jednak w porównaniu z innymi pożywkami o podobnej funkcji zajmuje drugie miejsce, wyprzedzając CHROMagar. Z tego powodu wiele laboratoriów preferuje ten drugi, chociaż jest on znacznie droższy..
Powinno być jasne, że użycie BIGGY Agar, a także innych podobnych środków, pomaga w szybkiej, przypuszczalnej identyfikacji, ale nigdy w potwierdzeniu. Dlatego muszą być dostępne dodatkowe metody identyfikacji; np. systemy identyfikacji Vitek 32 i API 20.
Indeks artykułów
Agar BiGGY jest uważany za częściowo selektywne podłoże do izolacji drożdży, zwłaszcza z rodzaju Candida, chociaż inne rodzaje mogą rosnąć.
Jest to również podłoże zróżnicowane, ponieważ w zależności od gatunku będą obserwowane różne cechy pod względem wyglądu, koloru, kształtu i wielkości. Jest uważane za podłoże chromogenne ze względu na rozwój różnych kolorów w koloniach.
Kolor kolonii drożdży wynika z obecności siarczynu bizmutu w agarze. Nickerson zdał sobie sprawę, że drożdże z rodzaju Candida dokonują zewnątrzkomórkowej redukcji siarczynu bizmutu, przekształcając go w siarczek bizmutu (nierozpuszczalną czarną substancję). Powoduje to powstawanie kolonii od jasnobrązowych do czarnych..
Ten agar zawiera wyciąg z drożdży i dekstrozę, które są źródłem podstawowych składników odżywczych i energii dla rozwoju drożdży. Glicyna jest stymulantem wzrostu drożdży, jednocześnie hamując wzrost niektórych bakterii.
W tym samym sensie cytrynian amonu i bizmutu, a także siarczyn sodu działają jako inhibitory wzrostu bakterii. Agar jest środkiem nadającym średnio stałą konsystencję.
Odważyć 45 g odwodnionej pożywki hodowlanej i rozpuścić w litrze wody destylowanej. Wstrząśnij i podgrzej mieszaninę, gotując przez 1 minutę, aż do całkowitego rozpuszczenia. Ta pożywka hodowlana nie nadaje się do sterylizacji w autoklawie.
Po schłodzeniu do około 45 ° C w łaźni wodnej wlać 20 ml na sterylne szalki Petriego..
Odwodnione podłoże ma kolor żółtawoszary i jest to żółtawo-biały żel, w którym można zaobserwować lekko kłaczkujący osad.
Wartość pH powinna wynosić 6,8 ± 0,2.
Przygotowaną pożywkę należy przechowywać w lodówce (4 ° C) i chronić przed światłem. Ponieważ jest to podłoże, którego nie można sterylizować w autoklawie, należy je jak najszybciej użyć. Zaleca się jego użycie w ciągu 3 dni od przygotowania.
Płytki inkubuje się w temperaturze pokojowej (25 ° C) przez 24, 48 i 72 godziny, a czas inkubacji można wydłużyć do 5 dni..
Każdy gatunek Candida ma pewne cechy, które odróżniają je od innych. Producenci pożywki opisują następujące cechy dla każdego gatunku:
-Kompleks Candida albicans: rozwija się na tym agarze w postaci gładkich, okrągłych, brązowych lub czarnych kolonii z lekką obwódką grzybni. Z wyjątkiem tego, że ciemny kolor nie przenika do medium.
-Candida tropicalis: kolonie są jasne, małe, ciemnobrązowe, z czarnym środkiem i niewielką grzybnią. Ciemny kolor rozprzestrzenia się w kierunku środka, co jest charakterystyczne dla tego gatunku, po inkubacji przez 72 godziny..
-Candida krusei tworzy duże, płaskie, szorstko wyglądające kolonie z brązową lub czarnawą obwódką.
-Candida parakrusei: kolonie średniej wielkości, przeważnie szorstkie, płaskie. Kolor może wahać się od jasnego ciemno czerwono-brązowego do jasno czerwonawo-brązowego. Na granicy kolonii rozległa, żółtawa grzybnia.
-Candida stellatoidea: Tworzy średnie, płaskie, ciemnobrązowe, prawie czarne kolonie. Rozwój grzybni jest bardzo rzadki.
Badanie przeprowadzone przez Yücesoy i Marol w 2003 roku wykazało, że podłoże CHROMagar ma lepszą czułość i specyficzność w różnicowaniu i identyfikacji różnych gatunków Candida niż agar BIGGY..
W celu kontroli sterylności niezaszczepione płytki inkubuje się w temperaturze 25 ° C w ciemności przez 24 do 48 godzin, przy czym oczekuje się, że nie dojdzie do żadnego wzrostu ani zmiany koloru..
Szczepy ATCC zalecane do kontroli jakości pożywki to:
Kompleks Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. We wszystkich z nich oczekuje się wzrostu, jak opisano powyżej..
Można również użyć następujących szczepów:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 i Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. W pierwszych dwóch spodziewane jest całkowite zahamowanie, ale w przypadku częściowo rosnących kolonii będą miały kolor kremowy.
W przypadku S. aureus oczekuje się, że będzie całkowicie zahamowany, ale jeśli rosną częściowo, ich kolonie są białe.
Niektóre bakterie są zdolne do rozwoju w tym podłożu i mogą nawet zmienić kolor na ciemny, symulując kolonię Candida, ale podczas wykonywania rozmazu kolonii i obserwacji pod mikroskopem można go łatwo wyrzucić.
Tabela: Charakterystyka kolonii niektórych drożdży na agarze BIGGY według pracy Yücesoy M i Marol S.
Jeszcze bez komentarzy