Plik agar z krwią jest to wzbogacona, zróżnicowana, ale nieselektywna, stała pożywka hodowlana. Służy do odzyskiwania i wzrostu wielu różnych mikroorganizmów z próbek klinicznych lub do hodowli subkultur..
Do wysiewu większości próbek klinicznych otrzymanych w laboratorium należy dołączyć klasyczny agar z krwią; z wyjątkiem próbek kału, które nie są przydatne, chyba że zostały przygotowane z pewnymi modyfikacjami.
Ta pożywka hodowlana składa się zasadniczo ze wzbogaconego podstawowego agaru i 5% krwi. Podłoże agaru może się zmieniać w zależności od potrzeb, ale będzie się składać głównie z peptonów, aminokwasów, witamin, ekstraktu mięsnego, chlorku sodu, agaru..
Jeśli chodzi o krew, zwykle wymagany jest kontakt z wiwarium w celu uzyskania krwi od zwierząt, takich jak owca, królik lub koń. Jednak nie zawsze jest to możliwe i czasami używa się ludzkiej krwi..
Podłoże agarowe z krwią można przygotować w laboratorium lub zakupić gotowe w dedykowanych firmach. Przygotowanie tego podłoża należy do najdelikatniejszych, niedbałość w jego przygotowaniu spowoduje skażenie wsadu.
Dlatego należy podjąć wszelkie możliwe środki ostrożności, a na końcu przeprowadzić kontrolę jakości, inkubując w temperaturze 37 ° C 1 płytkę na 100 przygotowanych.
Indeks artykułów
Agar z krwią jest wzbogaconym podłożem, ponieważ zawiera 5–10% krwi na podłożu agarowym jako głównym dodatkiem. Oba związki zawierają wiele składników odżywczych, a ta właściwość pozwala na rozwój większości bakterii hodowlanych..
Ten wzrost zachodzi bez ograniczeń; z tego powodu jest nieselektywny. Jeśli jednak do tej pożywki zostaną dodane związki, które zapobiegają rozwojowi niektórych mikroorganizmów, a sprzyjają rozwojowi innych, staje się ona selektywna. Dzieje się tak w przypadku dodania określonych rodzajów antybiotyków lub leków przeciwgrzybiczych.
Podobnie, agar z krwią jest podłożem różnicującym, ponieważ pozwala nam rozróżnić 3 typy bakterii: beta-hemolityczne, alfa-hemolityczne i gamma-hemolityczne..
Beta-hemolityki to te, które mają zdolność do całkowitej lizy lub rozbijania czerwonych krwinek, tworząc wyraźną aureolę wokół kolonii, dlatego wytwarzają ß lub ß-hemolizę, a mikroorganizmy nazywane są ß-hemolizami..
Przykładami bakterii ß-hemolitycznych są Streptococcus pyogenes Y Streptococcus agalactiae.
Alfa-hemolityki to te, które przeprowadzają częściową hemolizę, podczas której hemoglobina utlenia się do methemoglobiny, powodując zielonkawe zabarwienie wokół kolonii. Zjawisko to jest znane jako α-hemoliza lub α-hemoliza, a bakterie są klasyfikowane jako α-hemoliza..
Przykładami bakterii α-hemolitycznych są Streptococcus pneumoniae Y Paciorkowiec z grupy viridans.
Wreszcie istnieją tak zwane bakterie gamma-hemolityczne lub niehemolityczne. Rosną one na agarze bez powodowania na nim zmian, efekt znany jako hemoliza γ, a mikroorganizmy są hemolityczne γ.
Przykład bakterii hemolitycznej γ: niektóre szczepy Streptococcus grupy D (Streptococcus bovis i Enterococcus faecalis).
Podłoże do hodowli z agarem z krwią jest jednym z najczęściej stosowanych w laboratorium mikrobiologicznym..
Wśród mikroorganizmów zdolnych do wzrostu w podłożu agarowym z krwią są: bakterie ścisłe tlenowe, fakultatywne, mikroaerofilne, beztlenowe, Gram-dodatnie lub Gram-ujemne, bakterie szybko lub wolno rosnące.
Rosną również niektóre bakterie wymagające pożywienia lub wybredne, a także grzyby i drożdże. Podobnie, przydatne jest wykonanie subkultur lub reaktywacja szczepów, które są bardzo słabe metabolicznie..
Jednak wybór grupy krwi i podłoża agarowego będzie różny w zależności od prawdopodobnego drobnoustroju podejrzanego o wyzdrowienie i zastosowania, które zostanie podane na płytce (posiew lub antybiogram)..
Krew może być jagnięcą, królikiem, końską lub ludzką.
Najbardziej polecana jest krew jagnięca, z pewnymi wyjątkami. Na przykład, aby wyizolować gatunki Haemophilus, gdzie zalecaną krwią jest krew końska lub królika, ponieważ krew jagnięcina zawiera enzymy hamujące czynnik V.
Najmniej polecany jest człowiek, jednak najczęściej jest używany, być może dlatego, że jest najłatwiejszy do zdobycia.
Krew musi być odwłókniona, uzyskana bez jakiegokolwiek dodatku i od zdrowych zwierząt. Przy stosowaniu ludzkiej krwi należy wziąć pod uwagę kilka czynników:
Jeśli krew pochodzi od osób, które przeszły infekcje bakteryjne, będą miały specyficzne przeciwciała. W takich warunkach wzrost niektórych bakterii może zostać zahamowany..
Jeśli jest pozyskiwany z banku krwi, zawiera cytrynian i niektóre bakterie mogą nie rosnąć w jego obecności. Z drugiej strony, jeśli krew pochodzi od pacjentów przyjmujących antybiotyki, można zahamować rozwój wrażliwych bakterii..
A jeśli krew pochodzi od osoby z cukrzycą, nadmiar glukozy zakłóca prawidłowy rozwój wzorców hemolizy.
Podstawowy agar użyty do przygotowania agaru z krwią może być bardzo szeroki. Wśród nich są: agar odżywczy, agar infuzyjny mózg-serce, agar tryptykazowo-sojowy, agar Müeller Hinton, agar Thayer Martin, agar Columbia, agar Brucella, agar Campylobacter itp..
Baza ta jest najmniej wykorzystywana, ponieważ będzie uprawiać głównie mało wymagające bakterie, takie jak pałeczki jelitowe., Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, pośród innych. Nie zaleca się izolowania Streptococcus.
Jest jednym z najczęściej stosowanych jako podłoże agaru z krwią, ponieważ zawiera składniki odżywcze niezbędne do wzrostu większości bakterii, w tym Streptococcus sp i inne wymagające bakterie. Chociaż nie nadaje się do obserwowania wzorców hemolizy.
Do tej bazy zwykle używana jest krew jagnięca.
Można również przygotować warianty agaru z krwią, w którym dodaje się inne związki w celu izolacji niektórych mikroorganizmów. Na przykład, do izolacji służy agar infuzyjny z mózgiem serca z dodatkiem krwi królika, cystyny i glukozy Francisella tularensis.
Natomiast w przypadku tellurynu cystyny jest przydatny do izolacji Corynebacterium diphteriae. Można użyć krwi ludzkiej lub jagnięcej.
Przy pierwszej beta-hemolizie będzie widoczne jako wąskie halo, podczas gdy przy drugim halo będzie znacznie szersze.
Podobnie, ta baza razem z bacytracyną, skrobią kukurydzianą, krwią końską i innymi dodatkami wzbogacającymi (IsoVitaleX) jest używana do izolacji rodzaju Haemophilus sp z próbek dróg oddechowych.
Również jeśli doda się połączenie antybiotyków chloramfenikol - gentamycyny lub penicyliny - streptomycyny z końską krwią, idealnie nadaje się do izolacji wymagających patogennych grzybów, nawet z wyższą wydajnością niż agar Sabouraud z glukozą. Jest to szczególnie przydatne w izolowaniu Histoplasma capsulatum.
Baza ta jest najbardziej zalecana dla lepszej obserwacji wzoru hemolizy oraz do wykonywania testów diagnostycznych, takich jak taksony optokiny i bacytracyna. Jest to klasyczny agar z krwią, który jest używany rutynowo.
Na tej bazie można również przygotować specjalny agar z krwią Corynebacterium diphteriae, z tellurynem cystyny Y krew baranka.
Podobnie połączenie tego agaru z krwią jagnięcą i kanamycyną-wankomycyną jest idealne do wzrostu beztlenowców, zwłaszcza Bacteroides sp.
Baza ta uzupełniona krwią służy do wykonywania antybiogramów wymagających mikroorganizmów, np Streptococcus sp.
Jest również przydatny do izolacji bakterii, takich jak Legionella pneumophila.
Podłoże to jest idealne jako podłoże dla agaru z krwią, zwłaszcza gdy podejrzewa się rodzaj Neisseria Neisseria meningitidis, tak jak N. gonorrhoeae nie rośnie na agarze z krwią.
Służy również do wykonywania testów wrażliwości na Neisseria meningitidis.
Ta baza jest doskonała do wysiewu biopsji żołądka Helicobacter pylori.
Pożywkę przygotowuje się przez dodanie 7% krwi jagnięcej odwłóknionej antybiotykami (wankomycyna, trimetoprym, amfoterycyna B i cefsulodyna) w celu ograniczenia wzrostu innych rodzajów bakterii, które mogą być obecne..
Ta sama zasada uzupełniona krwią ludzką lub jagnięcą, kwasem nalidyksowym i kolistyną jest przydatna do izolacji Gardnerella vaginalis. Idealny również do oceny wrażliwości na antybiotyki tego samego mikroorganizmu.
Ponadto służy do przygotowania agaru z krwią do hodowli beztlenowców, z dodatkiem aminoglikozydów i wankomycyny..
Baza ta pozwala prawidłowo obserwować wzorce hemolizy.
Pożywka stosowana jako baza pod agar z krwią wraz z dodatkiem witaminy K jest idealna do hodowli bakterii beztlenowych. W takim przypadku zaleca się użycie krwi baraniej..
Pożywką izolacyjną jest agar Campylobacter z dodatkiem 5% krwi baraniej i 5 antybiotyków (cefalotyna, amfoterycyna B, trimetoprym, polimyksyna B i wankomycyna). Campylobacter jejuni w próbkach kału.
Każda firma handlowa przynosi instrukcje przygotowania litra pożywki z tyłu pojemnika. Odpowiednie obliczenia można wykonać, aby przygotować żądaną ilość, w zależności od wybranego agaru podstawowego.
Bazowy agar jest odwodniony (proszek), dlatego należy go rozpuścić w wodzie destylowanej o pH 7,3.
Ilość wskazaną przez wybrany podstawowy agar waży się i rozpuszcza w odpowiedniej ilości wody w kolbie, następnie ogrzewa na umiarkowanym ogniu i miesza ruchem obrotowym, aż cały proszek się rozpuści..
Po rozpuszczeniu sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 20 minut.
Opuszczając autoklaw, kolbę pozostawia się do ostygnięcia, aż temperatura oscyluje między 40 a 50 ° C; Jest to temperatura, którą utrzymuje ludzka skóra, a jednocześnie agar jeszcze się nie zestalił.
W tym celu należy dotknąć kolby ręką i jeśli ciepło jest do zniesienia, w idealnej temperaturze należy dodać odpowiednią ilość odwłóknionej krwi (50 ml na każdy litr agaru). Delikatnie wymieszać do homogenizacji.
Przejście agregacji krwi ma kluczowe znaczenie, ponieważ jeśli zostanie wykonane, gdy podłoże jest bardzo gorące, czerwone krwinki ulegną rozpadowi, a podłoże nie będzie służyło do obserwacji hemolizy.
Jeśli zostanie dodany zbyt zimno, utworzą się grudki, a powierzchnia nośnika nie będzie gładka, aby umożliwić prawidłowe rysowanie..
Podawać na sterylnych szalkach Petriego natychmiast po homogenizacji krwi. Około 20 ml wlewa się do każdej szalki Petriego. Ta procedura jest wykonywana w okapie z przepływem laminarnym lub w pobliżu palnika.
Podczas podawania agaru z krwią na szalkach Petriego na powierzchni płytki nie powinny pozostać pęcherzyki powietrza. Jeśli tak się stanie, płomień palnika Bunsena jest szybko przesuwany nad płytą, aby je wyeliminować..
Płytki pozostawia się do zestalenia i przechowuje w lodówce (2-8 ° C) odwróconą do momentu użycia. Przed użyciem płytek agarowych z krwią należy je zahartować (pozwolić na osiągnięcie temperatury pokojowej), aby można było je wysiać..
Przygotowane płytki wystarczają na około 1 tydzień.
Jeszcze bez komentarzy