Plik bulion malonianowy Jest to płynna pożywka hodowlana stosowana w teście diagnostycznym (test malonianowy), stosowana do różnicowania niektórych rodzajów z rodziny Enterobacteriaceae. Został stworzony przez Leifsona w 1933 roku i później zmodyfikowany przez Ewinga, który dodał niewielką ilość dekstrozy i ekstraktu drożdżowego do oryginalnej formuły..
Obecnie pożywka składa się z ekstraktu drożdżowego, siarczanu amonu, fosforanu dwupotasowego, fosforanu jednopotasowego, chlorku sodu, malonianu sodu, dekstrozy i błękitu bromotymolowego. Test ten jest generalnie częścią zestawu identyfikacji biochemicznej Enterobacteriaceae, pomagając w rozróżnieniu niektórych rodzajów i gatunków..
Test malonianu opiera się głównie na zdolności niektórych mikroorganizmów do wykorzystywania malonianu sodu jako jedynego źródła węgla oraz siarczanu amonu jako źródła azotu..
Test malonianu jest zwykle dodatni u niektórych gatunków z rodzajów Enterobacter, Klebsiella i Citrobacter. Natomiast większość gatunków z rodzajów Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus i Providencia daje reakcję negatywną.
Indeks artykułów
Test malonianu polega na pokazaniu bakterii, które są zdolne do wykorzystywania malonianu sodu jako jedynego źródła węgla i siarczanu amonu jako źródła azotu..
Większość enterobacteriaceae, które nie używają malonianu, może rosnąć na tym podłożu, przyjmując dekstrozę i wyciąg z drożdży jako składniki odżywcze..
W takim przypadku każda próba alkalizacji przy użyciu peptonów będzie przeciwdziałać wytwarzaniu kwasów powstałych w wyniku fermentacji dekstrozy. Podobnie fosforany dwupotasowe i jednopotasowe działają jako bufor, utrzymując pH na poziomie 6,7.
Dlatego też, gdy wynik testu jest negatywny, bulion zachowuje ten sam oryginalny kolor (zielony). W rzadkich przypadkach pożywka może zakwasić się w wyniku fermentacji dekstrozy; bez użycia peptonów i wskaźnika pH zmieniłby kolor podłoża na żółty. Aby tak się stało, pH musi spaść do 6.
Teraz, gdy wynik testu jest pozytywny, mówi się, że mikroorganizm używał malonianu i siarczanu amonu jako źródeł odpowiednio węgla i azotu, bez wykorzystywania innych składników..
W tym przypadku pożywka staje się zasadowa z powodu uwolnienia sodu i wynikającego z tego tworzenia się NaOH. W tym sensie wskaźnik pH (błękit bromotymolowy) zmienia kolor pożywki z zielonego na niebieski, gdy pH jest równe lub większe niż 7,6. Niebieski może być jasny lub intensywny (błękit pruski).
Wreszcie, chlorek sodu utrzymuje osmolarność pożywki, a woda jest rozcieńczalnikiem wszystkich składników..
Bulion tego samego koloru (zielony) - test ujemny
Bulion żółty: wynik negatywny
Jasny lub ciemnoniebieski bulion: wynik pozytywny
Istnieje odmiana zwana bulionem z malonianem fenyloalaniny, zwana także pożywką Shawa i Clarke'a. W takim przypadku można przeanalizować dwa testy, wykorzystanie malonianu jako źródła węgla i produkcję kwasu pirogronowego z fenyloalaniny..
Waży się ilość gramów określoną przez wkładkę wybranej firmy handlowej (może się ona różnić w zależności od). Odważone gramy zawieszono w jednym litrze wody destylowanej. Lekko podgrzać, aż do całkowitego rozpuszczenia. Rozprowadzić 3 ml pożywki do probówek 13/100 z bawełnianymi zatyczkami..
Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C przez 15 do 20 minut.
Ostudzić przed użyciem. Jeśli nie będą one używane od razu, należy je przechowywać w lodówce do momentu użycia. Przed zaszczepieniem doprowadzić buliony do temperatury pokojowej.
PH pożywki powinno wynosić 6,7 ± 0,2. Kolor przygotowanego podłoża to zieleń butelkowa.
Odważyć 11 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Reszta preparatu jest taka sama, jak opisano wcześniej.
Można go również przygotować, dodając 2 g / l fenyloalaniny do pożywki z bulionem malonianowym przed sterylizacją..
Jest używany jako część zestawu testów biochemicznych, które są gromadzone w celu identyfikacji bakterii z rodziny Enterobacteriaceae.
Pomaga rozróżnić:
-Rodzaj Klebsiella i Enterobacter (+) z rodzaju Escherichia i Serratia (-).
-Gatunek Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salami i Salmonella enterica ssp diarizonae (+), gatunku Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Z rodzaju Klebsiella zwykle (+) z rodzaju Actinobacillus (-).
-Czasami może pomóc w rozróżnieniu rodzajów i gatunków bakterii, które nie należą do rodziny Enterobacteriaceae, na przykład wśród niefermentujących pałeczek Gram-ujemnych. Alcaligenes faecalis (+) i Acinetobacter sp (-).
Pod zapalniczką pobiera się porcję czystej wody kolońskiej, używając odpowiednio wysterylizowanej i schłodzonej platynowej rączki. Pobrana próbka (lekki materiał inokulacyjny) jest rozpuszczana w bulionie malonianowym. Inkubować z luźną pokrywką w warunkach tlenowych w temperaturze 35 ° C ± 0,2 przez 24–48 godzin.
Bulion malonianowy można również zaszczepić z 18-24-godzinnej kultury w bulionie tryptykazowo-sojowym. W takim przypadku za pomocą sterylnej pipety pobiera się 0,01 ml i zaszczepia się bulionem malonianowym. Inkubować z luźną pokrywką w warunkach tlenowych w temperaturze 35 ° C ± 0,2 przez 24–48 godzin.
Pod koniec czasu wyniki są interpretowane. Każdy ślad niebieskiego koloru po 48 godzinach inkubacji należy uznać za pozytywny. Test nie powinien być interpretowany jako negatywny, dopóki nie upłynie 48-godzinny czas inkubacji..
W przypadku zastosowania wariantu bulionu z malonianem fenyloalaniny najpierw interpretuje się malonian, a następnie dodaje 5 kropli 1N HCl i 3-5 kropli 8% chlorku żelazowego. Ciemnozielony kolor jest interpretowany jako dodatni wynik testu na obecność fenyloalaniny. Jeśli wręcz przeciwnie, podłoże zmieni kolor na bladoniebieski, wynik testu na obecność fenyloalaniny jest ujemny..
Aby przeprowadzić kontrolę sterylności pożywki, jeden lub dwa buliony należy inkubować w temperaturze 35 ° C ± 0,2 przez 24 godziny inkubacji. Po tym czasie nie powinno już być zmętnienia ani zmiany koloru.
Znane lub certyfikowane szczepy mogą być używane do kontroli jakości, takie jak: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 i Escherichia coli ATCC 25922.
Oczekiwane rezultaty to:
Nie używać bulionu, który wykazuje zmętnienie, wytrąca się, zmianę koloru lub jakiekolwiek oznaki zepsucia.
Jeszcze bez komentarzy