Róża bengalska Jest to test laboratoryjny oparty na reakcji antygen-przeciwciało do diagnostyki brucelozy. Technika pozwala na wykrycie specyficznych przeciwciał przeciwko bakteriom Brucella abortus w próbkach surowicy ludzkiej. Wynik można przedstawić jakościowo lub półilościowo.
Forma jakościowa określa, czy pacjent ma pozytywny, czy negatywny wynik testu, to znaczy, czy są przeciwciała, czy nie. W międzyczasie raport półilościowy jest podawany w IU / ml i wskazuje przybliżoną ilość obecnych przeciwciał. Należy zauważyć, że przeciwciała będą produkowane tylko wtedy, gdy pacjent miał kontakt z mikroorganizmem.
Ze względu na swoją wielką prostotę, wysoką czułość i swoistość jest jedną z najczęściej stosowanych w medycynie technik seroaglutynacji jako wstępny test do diagnozy tej choroby..
Niektórzy badacze porównali skuteczność testu z różem bengalskim z innymi technikami, takimi jak seroaglutynacja (antygeny gorączkowe) i zauważyli, że chociaż istnieje dobra korelacja, widzieli pojedyncze przypadki, w których test na antygen gorączkowy był ujemny, a efekt Rose de Positive Flare.
Uzyskana różnica wynikała z faktu, że ci pacjenci mieli podklasę przeciwciał IgG przeciwko Brucella abortus z lepszą zdolnością wiązania przy kwaśnym pH, dlatego mogą reagować z odczynnikiem z różem bengalskim, ale nie z antygenami gorączkowymi.
W tym sensie zasugerowali, że odczynniki stosowane w technice antygenu gorączkowego należy zmodyfikować do kwaśnego pH, aby mogły wykryć tego typu przypadki..
Indeks artykułów
Odczynnik różu bengalskiego składa się z zawiesiny antygenowej. Składa się ze szczepu S99 Brucella abortus, rozcieńczony w kwaśnym buforze mleczanowym (pH 3,6) z dodatkiem fenolu i barwnika róż bengalski.
Dlatego w próbce poszukuje się przeciwciał anty-Brucella, jeśli są obecne, będą reagować z odczynnikiem antygenowym i będzie obserwowana makroskopowo widoczna reakcja aglutynacji. Test wykrywa przeciwciała IgM lub IgG.
Oznacza to, że może wykryć chorobę zarówno w jej ostrej fazie, w której przeważają przeciwciała IgM, jak i w jej przewlekłej fazie, w której przeważają przeciwciała IgG..
Stanowi to zaletę, ponieważ zwiększa czułość testu, ale jednocześnie jest wadą, ponieważ nie rozróżnia jednego etapu od drugiego, ponieważ reakcja z przeciwciałami IgM i IgG jest identyczna.
Test musi być zawsze wykonywany razem z kontrolą negatywną i kontrolą pozytywną. Kontrola negatywna zawiera surowicę zwierzęcą bez przeciwciał, a kontrola pozytywna zawiera surowicę pochodzenia zwierzęcego z 50 IU / ml przeciwciał przeciwko Brucella..
Bruceloza jest poważną chorobą, która bywa przewlekła i niebezpieczna, dlatego bardzo ważne jest wczesne jej zdiagnozowanie. Jest to choroba odzwierzęca, a ludzie mogą zostać zarażeni przez bezpośredni kontakt ze skażonym materiałem, przy czym najbardziej narażonymi osobami są weterynarze i hodowcy zwierząt..
Do zakażenia może również dojść poprzez spożywanie zakażonego surowego mięsa, wśród innych form zakażenia.
Ta choroba atakuje lokalnie lub ogólnoustrojowo. Postać ogólnoustrojowa jest najpoważniejsza, ponieważ może dotyczyć różnych narządów, w tym układu śródbłonka siateczki (wątroba, śledziona, szpik kostny), skóry (zapalenie tkanki łącznej i powiększenie węzłów chłonnych), układu oddechowego (zapalenie płuc), układu mięśniowo-szkieletowego (zapalenie stawów, zapalenie stawów krzyżowo-biodrowych i kręgosłupa) ), pośród innych.
Test z różem bengalskim jest bardzo przydatną techniką do przeprowadzania wstępnych badań przesiewowych, ponieważ jest bardzo tani, łatwy w użyciu oraz o dużej swoistości i czułości..
Przypadki fałszywie ujemnych i fałszywie dodatnich są bardzo rzadkie i mogą wystąpić u osób z bardzo niskim mianem przeciwciał (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 IU / ml).
-Zestaw Rose Bengal Kit
-Płytka aglutynacji białe tło
-Pipeta 50 µl
-Rotator (opcjonalnie)
-Wir
Dostępne w handlu zestawy Rose Bengal zawierają gotowe do użycia odczynniki.
-Odpuszczać odczynniki przed rozpoczęciem pracy.
-Płytki aglutynacyjne mają narysowane kółka, każdy dla innej próbki. Użyj 3 kółek, pierwszego dla kontroli negatywnej, drugiego dla próbki, a trzeciego dla kontroli pozytywnej.
-Umieść kroplę lub 50 µl kontroli i próbki w odpowiednim kółku.
-Wymieszać odczynnik z różem bengalskim za pomocą wiru. Umieść kroplę obok wcześniej umieszczonych.
-Wymieszaj drewnianymi wykałaczkami (użyj po jednej na każdą próbkę lub kontrolę). Wykonuj ruchy okrężne i rozprowadź w taki sposób, aby obejmowały całe koło.
-Umieść płytkę na automatycznym rotatorze przy 80 do 100 RPM lub obracaj ręcznie przez 4 minuty. Przeczytaj dowód na końcu tego czasu.
-Sprawdź, czy kontrole dawały zgodnie z oczekiwaniami. Porównaj reakcję próbki testowej z kontrolami. Podać jako pozytywne, jeśli obserwuje się aglutynację i jako negatywne, jeśli nie ma aglutynacji.
Pozytywny wynik testu wskazuje, że u pacjenta występuje ilość równa lub większa niż 25 IU / ml przeciwciał przeciw Brucella.
Jeśli w reakcji jakościowej próbka jest silnie pozytywna, można ją określić częściowo ilościowo. W tym celu wykonuje się seryjne podwójne rozcieńczenia próbki roztworem soli fizjologicznej. Opisaną powyżej procedurę przeprowadza się przy każdym rozcieńczeniu..
Jest również interpretowany przez makroskopową obserwację aglutynacji. Wynikiem będzie miano najwyższego rozcieńczenia, w którym zaobserwowano wynik dodatni.
Aby obliczyć przybliżoną wartość przeciwciał przeciwko Brucella, stosuje się następujący wzór:
25 IU / ml x miano reakcji = IU / ml
Na przykład, jeśli pacjent w teście półilościowym ma wynik dodatni przy rozcieńczeniu ½, ¼ i 1/8, a od rozcieńczenia 1/16 zaczyna dawać wynik ujemny, oznacza to, że miano pacjenta wynosi 8.
Stosowanie formuły:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
-Zestawy mają datę ważności i należy jej przestrzegać. Nie należy używać, jeśli upłynął termin przydatności odczynnika.
-Podczas używania upewnij się, że odczynnik nie zawiera cząstek stałych, ponieważ jest to oznaka zepsucia..
-Przechowywać w temperaturze od 2 do 8 ° C.
-Nie zamrażać, czynność ta nieodwracalnie uszkadza odczynnik.
-Zawsze przeprowadzaj test razem z kontrolą negatywną i pozytywną.
-Technika toleruje próbki surowicy z pewnym stopniem lipemii i hemolizy, jednak nie zaleca się stosowania przesadnie lipemicznych i zhemolizowanych surowic, oba warunki zmieniają wyniki testu..
-Przed rozpoczęciem analizy należy zawsze ogrzać odczynniki do temperatury pokojowej..
-Nie należy interpretować reakcji, które trwają dłużej niż zalecany czas, ponieważ generuje to raport fałszywie dodatnich, ponieważ po pewnym czasie odczynnik wytrąca się, symulując reakcję dodatnią.
-Technika jest w 100% czuła i ma swoistość 98%.
-Po półilościowym oznaczeniu 1000 IU / ml istnieje możliwość zaobserwowania efektu prozonalnego (fałszywie ujemny wynik z powodu nadmiaru przeciwciał w porównaniu z ilością antygenów).
Jeszcze bez komentarzy