Plik agar czekoladowy Jest to stała, wzbogacona, nieselektywna i nieróżnicująca pożywka hodowlana. Służy głównie do izolacji wymagających mikroorganizmów pod względem żywieniowym, chociaż może w nim rosnąć każdy rodzaj bakterii..
Dlatego jego przydatność wzrasta, szczególnie w wysiewie próbek normalnie sterylnych, takich jak płyn mózgowo-rdzeniowy i płyn stawowy. Chociaż jest to również zawarte w wybranych środkach do wysiewu próbek drobnoustrojów, ale w takich przypadkach konieczne jest dodanie antybiotyków, które hamują współistniejącą florę..
To medium ma charakterystyczny brązowy kolor bardzo podobny do czekolady, stąd jego nazwa. Preparat jest bardzo podobny do tego z agaru z krwią, tyle że w tym przypadku krew musi zostać podgrzana, aby czerwone krwinki uległy rozpadowi..
Jego przygotowanie, podobnie jak agar z krwią, jest bardzo delikatne, ponieważ łatwo ulega zanieczyszczeniu. Z tego powodu wiele laboratoriów woli nabywać to podłoże przygotowane już przez firmy komercyjne, które gwarantują jego jakość..
Indeks artykułów
Podłoże to składa się z bogatego w składniki odżywcze podłoża agarowego i podgrzanej krwi. Hemoliza krwinek czerwonych dostarcza czynnik X (hemina) i czynnik V (NAD), niezbędne do wzrostu niektórych mikroorganizmów, takich jak rodzaj Haemophilus. Jest również bardzo przydatny do izolowania Neisserias sp.
Podobnie jak agar z krwią, różne podłoża mogą być używane jako podłoże bazowe w zależności od potrzeb. Wśród zastosowanych pożywek jest wlew z mózgu i serca oraz agar z tryptykazą sojową, chociaż najbardziej zalecane są agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar i Thayer Martin agar..
Niektóre warianty agaru czekoladowego obejmują dostępny w handlu wzmocniony suplement o nazwie Isovitalex lub Polivitex..
Te suplementy zawierają witaminę B.12, L-glutamina, adenina, chlorowodorek guaniny, kwas p-aminobenzoesowy, dinukleotyd nikotynamidoadeninowy (NAD), pirofosforan tiaminy, azotan żelaza, chlorowodorek tiaminy, chlorowodorek cysteiny, L-cystyna i glukoza.
Należy zauważyć, że agar czekoladowy jest bardziej wzbogacony niż agar z krwią, ale nie pozwala na obserwację wzorców hemolizy..
To podłoże zawiera trzustkowy hydrolizat kazeiny i serca, trawienny hydrolizat mięsa, chlorek sodu, agar, ekstrakt drożdżowy i skrobię kukurydzianą. Jest również bogaty w witaminy, minerały i niezbędne aminokwasy.
Ta podgrzana baza krwi jest idealna do izolacji bakterii z rodzaju Neisseria. Z drugiej strony, jeśli do pożywki doda się dodatkowo suplement dla Brucelli, można wyodrębnić wspomniany mikroorganizm. Wyniki są lepsze dzięki krwi końskiej.
To podłoże zawiera peptony, skrobię kukurydzianą, jednozasadowe i dwuzasadowe bufory, chlorek sodu i agar..
Większość komercyjnie przygotowanych agarów czekoladowych pochodzi z tej bazy i nie zawiera podgrzanej krwi, ale zamiast tego syntetyczną mieszankę heminy i chemicznego dodatku czynników wzrostu, witamin, minerałów, aminokwasów, czynnika V i glukozy..
Służy do wykonywania badań wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe wymagających drobnoustrojów, takich jak Streptococcus pneumoniae używając 5% podgrzanej krwi barana.
Służy również do pierwotnej izolacji Neisserias i Haemophilus, ale w szczególnym przypadku izolacji Haemophilus Preferowane jest stosowanie krwi końskiej, ponieważ jest ona bogatym źródłem czynników X i V..
Z drugiej strony, jeśli próbka do zasiania pochodzi z niesterylnego obszaru, zaleca się dodanie antybiotyków w celu zahamowania normalnej flory tego obszaru..
Przykład próbek z dróg oddechowych, w przypadku których podejrzewa się obecność bakterii z rodzaju Haemophilus Bacytracyna służy do hamowania wzrostu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus i saprofityczne Neisserias.
W przypadku próbek wrzodu narządów płciowych, gdy jest to podejrzane Haemophilus ducreyi, Z powodzeniem zastosowano agar czekoladowy przygotowany w następujący sposób: agar Müeller-Hinton z 5% czekoladowaną krwią końską, 1% wzbogaceniem Isovitalex i 3 µg / ml wankomycyny.
To medium jest specjalne do izolacji plików Neisseria gonorrhoeae. Musi zawierać antybiotyki, aby hamować towarzyszącą florę. Używana jest krew jagnięca.
Powinieneś zobaczyć wskazania do przygotowania podstawowego agaru do użycia. Znajdują się one z tyłu pojemnika z odwodnioną pożywką. Ogólnie opisują, ile należy ważyć, aby przygotować litr pożywki.
W laboratorium można przygotować dokładną potrzebną ilość, może być większa lub mniejsza niż litr.
Do obliczenia, ile ważyć, aby przygotować żądaną objętość, stosuje się regułę trzech. Przykład:
Jeśli na 1 litr trzeba ważyć 40 g, a laboratorium wymaga 800 ml, mówi się:
1000 ml -40 gr
800 ml - X
Formuła będzie następująca:
X = 32 gr (ilość do zważenia na 800 ml).
Niezbędną ilość waży się i umieszcza w kolbie z wodą.
Podgrzej na umiarkowanym ogniu i delikatnie mieszaj ruchami obrotowymi, aż odwodniona pożywka całkowicie się rozpuści, gotując przez 1 minutę..
Kolbę umieszcza się w autoklawie w celu sterylizacji pożywki w 121 ° C przez 20 minut..
Opuszczając autoklaw, należy pozostawić go w spoczynku, aż temperatura pożywki osiągnie w przybliżeniu między 56 a 70 ° C, aby umieścić krew i mieszać, aż podłoże stanie się brązowe..
Jeśli dodajesz suplementy, to jest czas, aby to zrobić. Następnie wymieszaj i podawaj 20 ml na każdą sterylną szalkę Petriego.
Całą procedurę należy wykonać pod osłoną z przepływem laminarnym lub wokół palnika Bunsena..
Odstaw do zestalenia i przechowuj w lodówce odwróconą.
Podłoże podstawowe przygotowuje się w sposób opisany powyżej, a uzyskaną w handlu odwodnioną hemoglobinę rozpuszcza się i sterylizuje w autoklawie..
Oba roztwory pozostawia się do ostygnięcia do 50 ° C, łączy się i dodaje suplement. Wymieszać w warunkach aseptycznych, a następnie podawać na sterylnych szalkach Petriego..
Ważne jest, aby krew była umieszczona we wskazanej temperaturze, ponieważ jest ona idealna do lizy czerwonych krwinek, a jednocześnie utrzymuje czynnik V, który jest wrażliwy na temperaturę..
Na powierzchni agaru nie powinny pozostać żadne bąbelki. Z każdej partii 100 płytek jedną lub dwie płytki należy inkubować w piecu w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w celu sprawdzenia ich jałowości..
Aby uzyskać najlepsze rezultaty, agar czekoladowy należy użyć wkrótce po przygotowaniu..
Kontrolne szczepy bakteryjne należy przechowywać w laboratorium w celu oceny skuteczności świeżej pożywki dla wzrostu głównych drobnoustrojów o wysokich wymaganiach odżywczych o znaczeniu klinicznym..
Jeszcze bez komentarzy