Plik Agar Czapek (CZA) to selektywna stała pożywka hodowlana zaprojektowana specjalnie do hodowli bakterii i grzybów saprofitycznych. Został stworzony przez botanika Friedricha Johanna Franza Czapa, polskiego pochodzenia i amerykańskiego chemika Arthura Waylanda Doxa; Z tego powodu agar ten jest również znany jako pożywka Czapek-Dox..
Oryginalna pożywka była płynna, ale później dodano agar, aby uczynić ją stałą pożywką. Pożywka Czapek składa się z azotanu sodu, fosforanu bipotasu, siarczanu magnezu, chlorku potasu, siarczanu żelazawego, sacharozy, agaru i wody destylowanej..
PH agaru Czapek wynosi 7,3, ale istnieje wariant, do którego dodaje się 10% kwas mlekowy, którego pH utrzymuje się na poziomie 3,5. To kwaśne podłoże służy do hodowli mikroorganizmów kwasofilnych.
Z drugiej strony niektóre domy handlowe modyfikowały skład agaru Czapek, zmieniając siarczan magnezu i fosforan bipotasu na glicerofosforan; ta modyfikacja zapobiega tworzeniu się osadu fosforanu magnezu, obserwowanego przy konwencjonalnym wzorze. Istnieje również inny wariant, do którego dodaje się ekstrakt drożdżowy.
Wreszcie agar Czapek jest zalecany przez Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego APHA do badania Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Y Penicillium sp. Gatunki te charakteryzują się tym, że są mikroorganizmami środowiskowymi i patogenami oportunistycznymi..
Indeks artykułów
To podłoże zawiera sacharozę; Węglowodan ten służy jako źródło węgla, podczas gdy azotan sodu jest źródłem azotu, ale w przeciwieństwie do innych mediów, dostarczany azot jest nieorganiczny..
Z tego powodu pożywka Czapek jest uważana za selektywną, ponieważ mogą rosnąć tylko mikroorganizmy zdolne do wykorzystywania związków nieorganicznych jako jedynego źródła azotu..
Jako regulator osmolarności pożywki stosuje się fosforan bipotasu. Z kolei siarczan magnezu, chlorek potasu i siarczan żelazawy dostarczają niezbędnych minerałów do wzrostu mikroorganizmów saprofitycznych (wolno żyjących). Dzięki tej formule tworzy się osad fosforanu magnezu.
Wreszcie agar-agar jest związkiem, który zapewnia stałą konsystencję pożywce, a woda jest rozpuszczalnikiem dla wszystkich składników..
Dzięki zmodyfikowanej formule agaru Czapek nie tworzy osadu i poprawia wzrost niektórych grzybów.
Ekstremalna kwasowość Acid Czapek Agar sprawia, że jest to podłoże bardziej selektywne, pozwalające na wzrost tylko mikroorganizmów kwasofilnych, zdolnych do utylizacji nieorganicznego azotu. Natomiast agar drożdżowo-Czapek poprawia działanie niektórych grzybów.
Odważyć 49 g odwodnionej pożywki hodowlanej i rozpuścić w wodzie destylowanej. Ogrzewać do wrzenia. Często wstrząsaj mieszaniną, aż do całkowitego rozpuszczenia..
Rozprowadź rozpuszczoną mieszaninę w probówkach i autoklawuj w 121 ° C przez 15 minut. Podczas wyjmowania z autoklawu homogenizować przed położeniem probówek i pozostawić do zestalenia.
Autoklawuj rozpuszczoną mieszaninę w 121 ° C przez 15 minut i pozostaw do ostygnięcia do 50 ° C, homogenizuj i wlej 20 ml do sterylnych szalek Petriego. Pozostawić do zestalenia, odwrócić i przechowywać w lodówce do czasu użycia.
Wartość pH powinna wynosić 7,3 ± 0,2. Odwodnione podłoże ma kolor biały, a przygotowane podłoże jest jasnobursztynowe, lekko mętne z powodu obecności kłaczkującego osadu..
Przygotować jak już opisano, dodając 10 ml sterylnego 10% kwasu mlekowego na każdy litr przygotowanej pożywki. Zmodyfikowana pożywka Czapek musi mieć pH 3,5 ± 0,2.
Odważyć 45,4 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody. Reszta preparatu jest taka sama, jak opisano powyżej. Odwodnione podłoże ma kolor biały, a przygotowane podłoże białawe. Końcowe pH pożywki wynosi 6,8 ± 0,2.
Zwany także agarem z ekstraktem drożdżowym Czapek (CYA). Zawiera elementy klasycznego agaru Czapek plus ekstrakt drożdżowy.
Pożywka Czapek służy do poszukiwania mikroorganizmów saprofitycznych m.in. w próbkach gleby, warzyw, zbóż, powietrza, owadów..
Agar Czapek o kwaśnym pH służy do wzrostu mikroorganizmów kwasofilnych, natomiast zmodyfikowany agar Czapek jest szczególnie przydatny do tworzenia chlamydospor u gatunków kompleksu. Candida albicans.
Wreszcie agar drożdżowy Czapek jest bardzo przydatny do izolacji Aspergillus i Penicillium..
Aby wyszukać promieniowce w glebie, należy postępować w następujący sposób: próbkę traktuje się wodą fenolizowaną przez 30 min, a następnie 1 ml zawiesiny wysiewa się na agarze Czapek. Inkubować w 28 ° C przez 5 do 7 dni.
Próbki warzyw, zbóż i owadów umieszcza się bezpośrednio na agarze. Możesz również wykonać rozcieńczenia i wysiać 0,1 ml na powierzchnię agaru..
Do wysiewu stosuje się prostą pętlę lub igłę, impregnuje się ją wacikiem i zaszczepia się agarem, wykonując nakłucie, aż dotknie podstawy płytki. Inkubuj przez 24 godziny w 28 ° C i zbadaj pod mikroskopem powyżej i poniżej płytki, aby sprawdzić, czy utworzyły się chlamydospory..
Temperatura i czas inkubacji różnią się w zależności od rodzaju izolowanego mikroorganizmu. Płytki są na ogół inkubowane przez jeden do dwóch tygodni w zakresie temperatur od 20 do 25 ° C..
Jednak dla niektórych szczepów istnieją specyficzne warunki. Na przykład większość gatunków z rodzaju Aspergillus ma optymalny wzrost w temperaturze 30 ° C; jednak A. fumigatus rośnie w temperaturze 50 ° C.
Jeśli chodzi o czas inkubacji, jeden lub dwa tygodnie są normalne Candida albicans może rozwinąć się w ciągu 24 do 48 godzin w temperaturze 25 ° C.
Rozwija się po 12 dniach inkubacji w 27 ° C. Ich kolonie są małe (25 mm).
Kolonie mają aksamitny wygląd, z wyraźną białą obwódką, a pośrodku mają niebiesko-zielony odcień, który z wiekiem zmienia kolor na szary. Odwrotna strona kolonii jest pomarańczowa, umieszczając środek tego samego koloru ze względu na produkcję pigmentu.
Rozwija się z białą do żółtej grzybnią i czarnymi zarodnikami.
Powstają kremowe, jasnobeżowe kolonie. W zmodyfikowanym agarze Czapek tworzy chlamydospory.
Ciemnozielona grzybnia rozwija się po 7 dniach w 25 ° C.
Aby ocenić jakość pożywki hodowlanej, można wysiewać certyfikowane szczepy kontrolne, takie jak: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.
Aspergillus niger po około 5 dniach rozwija grzybnię o barwie białej do żółtej i czarne zarodniki Candida albicans będzie miał zadowalający wzrost po 24 godzinach inkubacji w 25 ° C; kolonie są koloru kremowego.
Niektóre badania wykazały, że do wyzdrowienia Actinomycetes agar z najlepszą wydajnością to agar ziemniaczano-dekstrozowy, na drugim miejscu jest agar Czapek, ale w przypadku odzyskiwania Aspergillus i Penicillium agar Czapek jest tym, który zapewnia najwyższy współczynnik odzysku..
Jeszcze bez komentarzy