Plik agar endo lub Endo to stała, zróżnicowana pożywka hodowlana o pewnym stopniu selektywności. Oryginalna formuła została stworzona przez Endo w 1904 roku w celu odróżnienia bakterii fermentujących laktozę od bakterii niefermentujących. Początkowo był przeznaczony do izolacji Salmonella typhi, ale później celem pożywki było poszukiwanie bakterii z grupy coli.
Zasada Endo Agar została zachowana, ale jego formuła przeszła niezliczone zmiany na przestrzeni lat. Obecnie pożywka składa się z hydrolizatu tkanki zwierzęcej, laktozy, wodorofosforanu dipotasu, siarczynu sodu, fuksyny zasadowej i agaru..
Główne zastosowanie pożywki wiąże się z izolacją i różnicowaniem pałeczek Gram-ujemnych należących do rodziny Enterobacteriaceae i innych bliskich rodzin..
Przez długi czas był używany do wykrywania bakterii z grupy coli w próbkach wody, nabiału i żywności, ale dziś użycie tego podłoża zostało wyparte przez inne o podobnych funkcjach. Jednak niektóre laboratoria mikrobiologiczne używają tego agaru do izolacji Enterobacteriaceae z próbek pochodzenia klinicznego..
Indeks artykułów
Agar Endo zawiera peptony, które są źródłem aminokwasów, azotu, węgla i energii, niezbędnych do wzrostu niewymagających mikroorganizmów..
Z drugiej strony lekko selektywny charakter agaru zapewnia dodatek siarczynu sodu i fuksyny zasadowej; oba składniki częściowo lub całkowicie hamują wzrost większości bakterii Gram-dodatnich.
Charakter różnicowy nadaje obecność węglowodanu ulegającego fermentacji, którym w tym przypadku jest laktoza i fuksyna zasadowa, która służy również jako wskaźnik pH..
Bakterie Gram-ujemne, które rosną na tym agarze i są zdolne do fermentacji laktozy, utworzą silne różowe kolonie; jest patognomoniczny dla Escherichia coli tworzenie ciemnoczerwonych kolonii z opalizującym zielonkawym metalicznym połyskiem. Wynika to z wysokiej produkcji kwasów z fermentacji węglowodanów..
Należy zauważyć, że podłoże wokół kolonii również przybiera intensywnie różowy kolor. Podczas gdy pałeczki Gram-ujemne nie powodujące fermentacji laktozy tworzą jasnoróżowe kolonie, podobne do średnich lub bezbarwnych.
Wodorofosforan dipotasowy wyrównuje pH podłoża, a agar jest składnikiem zapewniającym stałą konsystencję.
Odważyć 41,5 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Podgrzewać mieszaninę, często mieszając, aż medium całkowicie się rozpuści. Sterylizuj w autoklawie w 121 ° C, pod ciśnieniem 15 funtów, przez 15 minut.
Po wyjęciu z autoklawu pozostawić do ostygnięcia do temperatury około 45-50 ° C, przed podaniem wstrząsnąć mieszanką w celu ujednorodnienia. Wlej 20 ml do sterylnych szalek Petriego.
Pozwól płytkom zestalić się, odwróć i przechowuj w plaquero lub zawiń w ciemny papier przed przechowywaniem w lodówce. Bardzo ważne jest, aby chronić przygotowane podłoże przed bezpośrednim światłem. Zalecaną praktyką jest przygotowanie dokładnej ilości, której będziesz potrzebować.
Jeśli płytki są przechowywane w lodówce, przed użyciem należy je ogrzać..
Wartość pH pożywki powinna wynosić od 7,2 do 7,6, a kolor przygotowanej pożywki jest bladoróżowy..
Istnieje inna wersja agaru Endo (m-Endo), która jest zgodna ze wzorem McCarthy'ego, Delaneya i Grasso, która zawiera więcej związków i różni się formą preparatu.
Ten wariant zawiera: laktozę, tryptozę, enzymatyczny hydrolizat kazeiny, enzymatyczny hydrolizat tkanki zwierzęcej, chlorek sodu, dwuzasadowy fosforan potasu, siarczyn sodu, ekstrakt drożdżowy, monozasadowy fosforan potasu, fuksyna zasadowa, dezoksycholan sodu, siarczan laurylowy sodu i agar.
W tym przypadku 51 g odwodnionej pożywki odważa się i zawiesza w 1 litrze wody destylowanej zawierającej 20 ml etanolu..
Lekko podgrzewać, mieszając, aż podłoże całkowicie się rozpuści. Nie należy go przegrzewać ani autoklawować. Gdy mieszanina będzie jednorodna, podawać na sterylnych szalkach Petriego i pozostawić do zestalenia..
W niektórych krajach jest nadal używany do zliczania bakterii coli ogółem i kałowych bakterii z grupy coli w próbkach żywności i wody, zwłaszcza w celu wykrycia Escherichia coli jako główny wskaźnik zanieczyszczenia kałem.
Agar M-Endo jest rekomendowany przez Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) do monitorowania i kontroli programów dezynfekcji i oczyszczania ścieków, a także do oceny jakości wody pitnej..
Najczęściej stosowaną metodą jest filtracja membranowa, po wzbogaceniu próbki bulionem laurylosiarczanowym przez 2 do 4 godzin..
Może być również stosowany jako substytut agaru EMB w analizie mikrobiologicznej żywności i wody metodą najbardziej prawdopodobnej liczby (MPN), szczególnie w fazie pełnej potwierdzenia, aby potwierdzić obecność E coli z mętnych bulionów EC.
Aby ocenić jakość przygotowanej partii agaru Endo, wysiewa się znane lub certyfikowane szczepy kontrolne..
Wśród szczepów, które można wykorzystać do tego celu, są: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 i Enterococcus faecalis ATCC 11700.
Szczepy wysiewa się przez wyczerpanie i inkubuje w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.
Oczekiwane rezultaty to:
-Podłoże endo ma niską moc selektywną, dlatego jest możliwe, że niektóre mikroorganizmy Gram-dodatnie, takie jak Staphylococcus, Enterococcus, a nawet drożdże mogą rosnąć.
-Na tym podłożu mogą rozwijać się inne pałeczki nienależące do rodziny Enterobacteriaceae, jak na przykład Pseudomonas sp Y Aeromonas sp. Charakterystyczne dla tych szczepów są bezbarwne nieregularne kolonie.
-To przygotowane podłoże jest bardzo wrażliwe na światło, dlatego długotrwałe narażenie na jego działanie pogarsza układ wskaźnika, nieodwracalnie uszkadzając medium..
-Składniki pożywki są uważane za rakotwórcze, dlatego należy unikać bezpośredniego kontaktu.
-Odwodnione podłoże jest bardzo higroskopijne i należy je przechowywać w oryginalnym opakowaniu w temperaturze pokojowej, szczelnie zamknięte i w suchym miejscu..
Jeszcze bez komentarzy