Plik agar ziemniaczano-glukozowy Jest to stała, nieselektywna odżywcza pożywka hodowlana. Mogą w nim rosnąć gatunki bakterii i grzybów, ale jego zastosowanie jest szczególnie wskazane do izolacji grzybów strzępkowych i drożdżaków. Jest również znany jako pożywka PDA dla angielskiego wyrażenia Potato Dextrose Agar.
Jest szczególnie przydatny do izolacji grzybów fitopatogennych, czyli atakujących rośliny. Aby wysiać próbki z zakażonych warzyw, można zastosować inne środki, takie jak agar Sabourauda lub malta-agar, jednak do rutynowego stosowania preferowany jest agar ziemniaczano-dekstrozowy ze względu na uzyskanie większej zarodnikowania..
Służy również do liczenia kolonii grzybów w próbkach kosmetyków, produktów farmaceutycznych i niektórych produktów mleczarskich. Nadaje się również do wysiewu próbek skrawków skóry w poszukiwaniu dermatofitów, które bardzo dobrze rosną na tym podłożu, rozwijając swoje charakterystyczne pigmenty..
Podłoże z glukozą ziemniaczaną jest bardzo prostym i łatwym do przygotowania w laboratorium podłożem. Zawiera, jak sama nazwa wskazuje, napar z ziemniaków, dekstrozę i agar-agar. Dodatkowo można dodać substancje hamujące, aby zapobiec rozwojowi bakterii i zwiększyć selektywność w stosunku do gatunków grzybów..
Indeks artykułów
Agar ziemniaczano-glukozowy jest pożywką, która dostarcza składników odżywczych niezbędnych do rozwoju grzybów strzępkowych i drożdży..
Połączenie naparu ziemniaczanego z glukozą stanowi doskonałe źródło energii dla zadowalającego wzrostu grzybów. Podczas gdy agar jest tym, który zapewnia konsystencję pożywce.
Pożywka sama w sobie nie hamuje wzrostu bakterii, dlatego jest pożywką nieselektywną. Aby był selektywny, potrzebuje dodatku substancji hamujących, takich jak kwas winowy czy antybiotyki..
Jest przygotowywany w następujący sposób:
Przede wszystkim ziemniaki są bardzo dobrze myte, usuwając posiadaną ziemię. Są krojone w cienkie plasterki ze wszystkim i skorupą. Odważono 200 g ziemniaków i gotowano w litrze wody destylowanej przez pół godziny.
Na koniec przefiltruj lub przecedzić cały preparat przez gazę.
Otrzymaną ciecz uzupełnia się wodą destylowaną do 1 litra. Do infuzji dodać 20 g agaru-agaru i 20 g dekstrozy, dobrze wymieszać i autoklawować w 121 ° C pod ciśnieniem 15 funtów przez 15 minut..
Pozostawić do ostygnięcia do 50 ° C i podawać na sterylnych szalkach Petriego. Przygotowane talerze są przechowywane w lodówce..
Można również przygotować kliny z agarem ziemniaczano-glukozowym..
W tym przypadku przed sterylizacją w autoklawie 12 do 15 ml pożywki umieszcza się w probówkach, następnie autoklawuje, a po pozostawieniu kładzie na specjalnych podporach aż do zestalenia. Przechowywać w lodówce.
Pożywka ma pH 5,6 ± 0,2, jednak niektóre laboratoria dodają 10% kwas winowy w celu obniżenia pH do 3,1 ± 0,1 w celu zahamowania wzrostu bakterii..
W tym samym sensie inne laboratoria wolą dodawać antybiotyki, aby były selektywne w hodowli grzybów i zapobiegały rozwojowi bakterii..
Odważyć 39 g dostępnego w handlu odwodnionego podłoża i rozpuścić w jednym litrze wody destylowanej. Odstaw na 5 minut.
Mieszaninę ogrzewa się z częstym mieszaniem, aż do całkowitego rozpuszczenia. Następnie jest sterylizowany w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut..
Można przygotować talerze lub kliny. Postępuj jak opisano powyżej.
PH wynosi 5,6 ± 0,2. Jeśli pożądane jest pH 3,1, przed podaniem na płytki należy dodać 14 ml sterylnego 20% kwasu winowego..
Surowe podłoże jest beżowe, a przygotowane podłoże jest jasnobursztynowe o lekko mętnym lub opalizującym wyglądzie..
Liście są pocięte na kawałki.
W szklance o pojemności 50 cm3 z 50% alkoholem umieść kawałki liści (poplamione i zdrowe kawałki), aby zdezynfekować powierzchnię przez 20 do 30 sekund. Wyrzuć alkohol i dodaj 20% podchlorynu sodu na 40 do 50 sekund, jeśli są to cienkie liście i wydłuż czas do 80 sekund, jeśli jest to kora i kłody.
Wyrzucić podchloryn sodu, zdezynfekowane części wyjąć sterylną szczypcami i umieścić na powierzchni pożywki (maksymalnie 10 sztuk). Data i inkubować w temperaturze 20–30 ° C.
Jeśli owoc jest mięsisty, otwórz owoc zaatakowany przez grzyba i wyjmij kawałki sterylnym skalpelem, zarówno z chorych, jak i zdrowych części i umieść je na powierzchni agaru.
Jeśli owoc jest cytrusowy, taki jak cytryna lub pomarańcza, należy go otworzyć i wysiać nasiona.
Kiedy powierzchnia owocu jest porażona i obserwuje się zarodniki, idealnym rozwiązaniem jest użycie metody tarcia na talerzu; Polega na dotknięciu zarodników wysterylizowaną i schłodzoną szpatułką w kształcie litery „L”, a następnie wykonanie zygzaka wysiewu 2 do 3 razy na agarze.
Są dezynfekowane zgodnie z opisem na liściach, a następnie umieszczane na agarze.
Wykonuje się skrobanie kory, a następnie pobiera się kawałki zdrowej i chorej części i wysiewa bezpośrednio na agar.
Wysiane płytki inkubuje się w warunkach tlenowych w 20-30 ° C przez 72 godziny.
Pobieranie próbek powinno odbywać się za pomocą ostrza skalpela nr 11, w celu obcięcia dotkniętych włosów, łusek skóry lub paznokci w poszukiwaniu dermatofitów. Przed pobraniem próbki obszar należy zdezynfekować 70% alkoholem..
W przypadku łuszczących się zmian należy zeskrobać krawędź zmiany, ponieważ istnieje większe prawdopodobieństwo znalezienia tam grzyba.
W przypadku zmian wysiękowych próbkę pobiera się suchym lub mokrym wacikiem. Natychmiast wysiać na agarze z glukozą ziemniaczaną lub agarem Sabouraud. Unikaj środków transportu.
Inną metodą pobierania próbek jest technika kwadratowego dywanu Mariata i Adana Campos. W takim przypadku dotknięty obszar pociera się 5 razy kawałkiem sterylnej wełny do późniejszej uprawy..
Próbkę można umieścić bezpośrednio w pożywce hodowlanej.
W zależności od patologii dotkniętą część można odciąć lub wyrwać z korzeniami. Umieść próbkę w pożywce hodowlanej.
Określoną część dotkniętego paznokcia można zdrapać lub przeciąć. Zależy to od rodzaju kontuzji.
Przed wysianiem pokrój próbkę na 1 mm kawałki w celu zwiększenia prawdopodobieństwa kontaktu grzyba z pożywką hodowlaną..
Kolonie uzyskane na płytce izoluje się w probówkach zawierających agar z glukozą ziemniaczaną w celu przeprowadzenia makroskopowych badań kolonii (wygląd, kolor, konsystencja, stopień rozwoju.
Badanie mikroskopowe (obserwacja struktur i ich formacji) może być przeprowadzone za pomocą mikrokultur lub bezpośredniej obserwacji pod mikroskopem pomiędzy blaszką a blaszką..
Pożywkę tę można również stosować do określania obciążenia grzybami i drożdżami obecnymi w próbkach roślin, żywności, kosmetyków lub leków. W tym celu stosuje się agar ziemniaczano-dekstrozowy z dodatkiem antybiotyków, takich jak: (chloramfenikol, chlorotetracyklina lub oba).
Wlej 1 ml próbki - najlepiej rozcieńczonej - do jałowej i pustej szalki Petriego, a następnie rozpuść korek z agarem ziemniaczano-dekstrozowym i pozostaw do ostygnięcia do 45 ° C. Wlej na szalkę Petriego i obracaj, aż się ujednorodni. Odstaw do zestalenia.
Inkubuj w warunkach tlenowych w temperaturze 20–25 ° C (pleśnie) lub 30–32 ° C (drożdże) przez 5–7 dni lub dłużej, w zależności od rodzaju poszukiwanego grzyba i rodzaju próbki. Do inkubacji w obu zakresach temperatur można użyć dwóch płytek.
Agar z glukozą ziemniaczaną może być stosowany do utrzymania żywotnych szczepów grzybów przez kilka lat.
Aby to zrobić, grzyb hoduje się w kawałkach agaru z glukozą ziemniaczaną, a gdy już rośnie, jest on pokrywany olejem mineralnym. Olej powinien być sterylizowany w autoklawie przez 45 minut i mieć lepkość około 300 do 330 Saybolt. Olej powinien znajdować się 1 do 2 cm powyżej końcówki skosu.
Z każdej przygotowanej partii należy pobrać 1 lub 2 płytki i inkubować w 25 ° C przez 48 godzin lub w 20 ° C przez 96 godzin. Dobra kontrola bezpłodności to taka, w której nie obserwuje się rozwoju kolonii..
Znane lub certyfikowane szczepy kontrolne, takie jak:
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. We wszystkich przypadkach oczekiwany jest dobry wzrost.
Jeszcze bez komentarzy