Plik Agar Salmonella-Shigella znany również jako agar SS, jest to średnio selektywne i różnicujące podłoże, specjalnie zaprojektowane do izolacji bakterii enteropatogennych z rodzaju Salmonella i Shigella, zarówno z próbek środowiskowych, jak i klinicznych..
Agar SS ma złożony skład; Składa się z ekstraktu mięsnego, peptonu, laktozy, soli żółciowych, cytrynianu sodu, tiosiarczanu sodu, cytrynianu żelaza, agaru, neutralnej czerwieni, jasnozielonej i wody destylowanej. Ze względu na dużą selektywność można wysiewać próbki z obfitą florą mieszaną..
W laboratoriach mikrobiologicznych podłoże Salmonella-Shigella jest szeroko stosowane do badania obecności Salmonelli i Shigella w próbkach kału z biegunką, ściekach, wodzie pitnej i żywności..
Czasami konieczne jest użycie bulionu wstępnego wzbogacania (bulion laktozowy) i bulionu wzbogacającego (bulion selenitowo-cystynowy) w celu odzyskania szczepów Salmonella.
Kroki te są wymagane, gdy podejrzewa się występowanie Salmonelli w bardzo małej ilości lub gdy szczep może być nadużywany w procesach produkcji przemysłowej, głównie w przetworzonej żywności. Wskazane jest również wzbogacenie próbek kału od pacjentów leczonych antybiotykami..
Następnie wzbogacony bulion można wysiać na agarze Salmonella-Shigella i innych podobnych pożywkach, takich jak agar z ksylozą, deoksycholanem lizyny (XLD) i dojelitowym agarem Hektoen (HE)..
Indeks artykułów
Każdy składnik pożywki hodowlanej Salmonella-Shigella ma określoną funkcję, a mieszanina jako całość nadaje jej właściwości, które ją charakteryzują..
Ekstrakt z mięsa i pepton (trawione kazeiną i tkanką zwierzęcą) dostarczają niezbędnych składników odżywczych (azot, węgiel i witaminy) do rozwoju mikroorganizmów, które tolerują pozostałe składniki..
Agar-agar jest odpowiedzialny za zapewnienie stałej konsystencji pożywce.
To podłoże jest wysoce selektywne, ponieważ zawiera sole żółciowe, cytrynian sodu i jasnozielony. Dlatego hamuje wzrost wszystkich bakterii Gram-dodatnich i większości pałeczek Gram-ujemnych, w tym niektórych bakterii z grupy coli..
Podczas gdy bakterie z rodzaju Salmonella i niektóre szczepy Shigella wspierają te związki.
Przede wszystkim rodzaj Salmonella jest bardzo odporny na sole żółciowe, do tego stopnia, że są one zdolne do życia w woreczku żółciowym niektórych pacjentów będących nosicielami, którzy nieustannie wydalają bakterie ze stolca..
Laktoza to ulegający fermentacji węglowodan, który pomaga odróżnić szczepy fermentujące laktozę od niefermentujących. O tej właściwości świadczy obecność wskaźnika pH, którym w tym podłożu jest czerwień fenolowa.
Szczepy fermentujące laktozę dają czerwone kolonie, podczas gdy szczepy niefermentujące są bezbarwne. Ta cecha jest ważna, ponieważ Salmonella i Shigella nie fermentują laktozy..
Z drugiej strony, to podłoże zawiera tiosiarczan sodu jako źródło siarczku i cytrynian żelazowy jako źródło żelaza. Oba związki są zdolne do różnicowania bakterii zdolnych do wytwarzania siarkowodoru. Reagują one tworząc widoczny, nierozpuszczalny czarny osad siarczku żelaza..
Ta właściwość występuje w niektórych szczepach z rodzaju Salmonella. Zwykle ich kolonie są płaskie, bezbarwne z czarną kropką pośrodku. Reszta salmonelli nie produkuje H.dwaS i rozwijają się jako bezbarwne kolonie.
Z drugiej strony kolonie z rodzaju Shigella są płaskie, bezbarwne bez czernienia..
To medium jest bardzo proste w przygotowaniu.
Odważyć 63 g odwodnionej komercyjnej pożywki i rozpuścić w litrze wody destylowanej. Podgrzej roztwór i zamieszaj. Mieszanina może gotować się do minut.
To podłoże nie może być sterylizowane w autoklawie. Po rozpuszczeniu podaje się bezpośrednio na pojedynczych lub podwójnych sterylnych talerzach..
Po zestaleniu układa się je odwrotnie w płytkach i przechowuje w lodówce (2-8 ° C) do czasu użycia..
Po przygotowaniu pożywka powinna mieć pH 7,2 ± 0,2 i pomarańczowo-czerwoną barwę..
Ważne jest, aby umożliwić rozgrzanie się płytek przed zaszczepieniem próbek. Oryginalną próbkę można wysiać bezpośrednio, wyrzucając materiał na część agaru, a następnie stamtąd wysychając przez wyczerpanie.
W przypadku stosowania bulionów wzbogaconych przepuścić porcję bulionu selenitowego i wysiać szpatułką drigalskiego.
Inkubować w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.
Należy wziąć pod uwagę, że liczba gramów do zważenia i końcowe pH pożywki mogą się różnić w zależności od domu handlowego. Środkowa baza zawsze przynosi wskazania do jej przygotowania.
Jest często stosowany w analizie kultur kału oraz w badaniach mikrobiologicznych ścieków, wody pitnej i próbek żywności..
Często przygotowuje się podwójne płytki, po jednej stronie umieszcza się agar Salmonella-Shigella, a po drugiej agar XLD.
-Niektóre szczepy Shigella nie rosną na tym podłożu. Dlatego nie jest zalecane do pierwotnej izolacji tego rodzaju..
-Nie każda przezroczysta kolonia z czarnym środkiem wskazuje na Salmonellę; Należy przeprowadzić testy biochemiczne, aby dokonać prawidłowej identyfikacji, ponieważ kolonie niektórych szczepów Proteus są nie do odróżnienia od kolonii Salmonella.
-Odwodnione podłoże należy chronić przed wpływem środowiska, ponieważ jest bardzo higroskopijne. Dlatego należy go przechowywać w suchym i dobrze zamkniętym środowisku. Otwarte przez bardzo krótkie okresy.
-Z czasem sole żółciowe w pożywce mogą wytrącać się, tworząc matowy obraz w agarze, ale nie ma to wpływu na wyniki..
-Niektóre szczepy Shigella mogą powoli fermentować laktozę.
Aby udowodnić, że pożywka działa prawidłowo, zaleca się posadzenie znanych lub certyfikowanych szczepów kontrolnych i obserwację, czy wzrost spełnia oczekiwane cechy..
Do tego możesz użyć szczepów E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium lub Enterococcus faecalis.
Oczekiwane rezultaty to:
Escherichia coli --kolonie różowe wypukłe.
Enterobacter i Klebsiella- duże kolonie i czerwone lub różowe śluzowce.
Shigella flexneri --klarowne lub bezbarwne płaskie kolonie.
Salmonella typhimurium - bezbarwne kolonie z czarnym środkiem.
Enterococcus faecalis-- całkowite zahamowanie.
Jeszcze bez komentarzy