Plik agar z siarczynem bizmutu to stała, selektywna i zróżnicowana pożywka hodowlana, specjalnie opracowana do izolacji Salmonella enterica podgrupa enterica serotyp Typhi, wśród innych gatunków Salmonelli. Podłoże jest znane jako agar BSA ze względu na akronim w angielskim Bismuth Sulfite Agar..
Oryginalna receptura agaru z siarczynem bizmutu została stworzona w 1927 r. Przez Wilsona i Blaira (podłoże z glukozą bizmutu i siarczynem żelaza); Zawierał siarczyn sodu, glukozę, roztwór bizmutu, cytrynian amonu, siarczan żelazawy i agar..
Obecnie istnieje modyfikacja oryginalnego podłoża, składającego się z ekstraktu mięsnego, peptonów mięsnych i kazeinowych, wskaźnika siarczynu bizmutu, glukozy, fosforanu disodu, siarczanu żelazawego, jasnozielonego i agar-agaru..
Istnieje wiele sposobów izolacji gatunków Salmonella, ale jeśli chodzi o odzyskanie serotypu Typhi, agar z siarczynem bizmutu ma nad nimi znaczącą przewagę, ponieważ w większości przypadków uzyskuje się bardzo niski lub żaden odzysk tego mikroorganizmu..
Jednak przy próbie izolacji enteropatogenów konieczne jest użycie więcej niż jednego rodzaju podłoża, ponieważ agar z siarczynem bizmutu jest mniej skuteczny w przypadku innych gatunków Salmonella i rodzaju Shigella, które są zahamowane lub rozwijają się bardzo słabo. W tym agarze.
Należy zauważyć, że ze wszystkich gatunków Salmonella serotyp Typhi jest jednym z najważniejszych enteropatogenów u ludzi i jest jego jedynym rezerwuarem. Ten serowar powoduje dur brzuszny, zapalenie żołądka i jelit, bakteriemię i posocznicę..
Z tego powodu ważne jest, aby uwzględnić ten agar podczas analizy próbek wody, kału lub żywności, w przypadku podejrzenia jego obecności..
Indeks artykułów
Podobnie jak większość podłoży hodowlanych, Bismuth Sulfite Agar zawiera składniki odżywcze sprzyjające rozwojowi bakterii, takie jak peptony i wyciąg z mięsa. Podobnie glukoza działa jako źródło energii i węgla..
Jednak nie wszystkie bakterie będą rosły na tym podłożu, ponieważ podłoże z siarczynem bizmutu jest podłożem selektywnym. Zawiera związki hamujące wzrost mikroorganizmów Gram-dodatnich i niektórych bakterii Gram-ujemnych. Te związki to: wskaźnik siarczyn bizmutu i jasnozielony.
Ze swojej strony fosforan disodowy utrzymuje osmolarność i pH pożywki.
Dodatkowo agar z siarczynem bizmutu jest pożywką różnicującą dzięki obecności siarczanu żelazawego, który wskazuje na tworzenie się HdwaS. HdwaS utworzony przez bakterie reaguje z siarczanem żelazawym i tworzy wyraźnie widoczny nierozpuszczalny czarny osad.
Wreszcie agar-agar nadaje pożywce stałą konsystencję..
Odważyć 52,3 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w jednym litrze wody. Podgrzewać mieszaninę do wrzenia przez 1 minutę, często mieszając, aż do całkowitego rozpuszczenia. Nie przegrzewaj zbyt mocno. To podłoże nie jest sterylizowane w autoklawie, ponieważ ekstremalne ciepło uszkadza podłoże hodowlane..
Pozostawić do ostygnięcia do 45 ° C i wstrząsnąć przed podaniem na sterylnych szalkach Petriego. Zaleca się wykonywanie płyt o dobrej grubości. W tym celu do każdego talerza należy wlać 25 ml. Niech zestalą się. Ponieważ jest to podłoże, które nie jest sterylizowane, sugeruje się jego natychmiastowe użycie.
Jednak badanie przeprowadzone przez D'aousta w 1977 r. Wykazało, że istnieje lepszy powrót do zdrowia Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis Ponieważ podłoże agarowe z siarczynem bizmutu starzeje się, nie ma to wpływu na wyniki badań serotypów Typhi Y Paratyphi B.
D'aoust zaleca używanie płytek czwartego dnia chłodzenia, chociaż ostrzega, że wraz z wiekiem selektywność spada, co ułatwia rozwój szczepów Proteus vulgaris.
Z tego powodu w przypadku próbek silnie zanieczyszczonych, takich jak kał, zaleca się stosowanie świeżo przygotowanej pożywki. W innym przypadku użyć w 4. dniu przygotowania. Inni autorzy zalecają używanie talerzy następnego dnia po ich przygotowaniu, przechowywanych w lodówce..
Schłodzone talerze należy hartować przed użyciem. PH pożywki powinno wynosić 7,5 ± 0,2. Surowe podłoże ma kolor beżowy, a przygotowane podłoże jest zielono-szare i opalizujące.
Wśród próbek, które można sadzić na tym podłożu, znajdują się próbki kału, wody pitnej lub ścieków i żywności..
W celu ulepszenia izolatów zaleca się przeprowadzenie zabiegu wstępnego wzbogacenia bulionem laktozowym, a po wzbogaceniu bulionem tetrationianowym lub bulionem cystynowo-seleninowym, przed wysiewem na agar z siarczynem bizmutu..
Płytki inkubuje się w temperaturze 35 ° C ± 0,2 przez 24 do 48 godzin w aerobiozie.
Kolonie Salmonella Typhi są zwykle widoczne na tym agarze w ciągu 24 godzin z czarnym środkiem i otoczone jasnozieloną aureolą. Natomiast po 48 godzinach stają się całkowicie czarne z powodu tworzenia się siarkowodoru.
Salmonella Paratyphi A przedstawia kolonie o zmiennej charakterystyce. Po 18 godzinach inkubacji można zaobserwować czarne, zielone lub przezroczyste kolonie o śluzowatym wyglądzie. Podczas gdy po 48 godzinach są całkowicie czarne, a czasem z wyraźnym metalicznym połyskiem..
S. Paratyphi A ma tendencję do zaczernienia środowiska wokół kolonii.
Salmonella sp pokazują czarne lub zielonkawo-szare kolonie, z metalicznym połyskiem lub bez, i mogą, ale nie muszą, zaczerniać otaczające środowisko.
Szczepy coli są generalnie całkowicie zahamowane, ale jeśli rosną, rozwijają się jako nieprzezroczyste zielone lub brązowe kolonie bez metalicznego połysku. Nie plamić podłoża wokół kolonii.
-Bardzo słabe inokulum może powodować kolonie Salmonella Typhi jasnozielony, niezauważalny, a kultura jest opisywana jako negatywna.
- Agar z siarczynem bizmutu może hamować regenerację niektórych gatunków Salmonella, takich jak S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-To podłoże hamuje większość gatunków z rodzaju Shigella.
- S. Typhi i S. arizonae może dać bardzo podobne kolonie.
-Bakterie z grupy coli wytwarzające H.dwaS, takie jak Proteus i Citrobacter, wytwarzają kolonie podobne do kolonii Salmonella, dlatego konieczne jest wykonanie biochemicznych testów identyfikacyjnych.
-Aby uzyskać izolowane kolonie, należy wykonać dobre tworzenie pasm; tylko w ten sposób można zaobserwować typowe cechy kolonii z rodzaju Salmonella.
W celu kontroli sterylności niezaszczepioną płytkę inkubuje się w 37 ° C, oczekuje się, że nie nastąpi wzrost ani zmiana koloru..
Do kontroli jakości znane szczepy, takie jak:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Oczekuje się, że Escherichia coli Y Shigella flexneri są częściowo hamowane przez rozwój odpowiednio zielonkawo-brązowych i brązowych kolonii. Natomiast obie salmonelle muszą mieć doskonały rozwój z czarnymi koloniami z metalicznym połyskiem i wreszcie Enterococcus faecalis musi być całkowicie zahamowany.
Jeszcze bez komentarzy