Plik błękit laktofenolowy lub bawełniany błękit to preparat o prostych właściwościach barwiących. Jest używany w laboratoriach klinicznych głównie do barwienia struktur grzybowych, takich jak strzępki, rurki zarodkowe i zarodniki..
Pomaga w przypuszczalnej lub wstępnej diagnostyce niektórych grzybów, jednak zawsze wskazane jest wzmocnienie diagnozy bardziej szczegółowymi testami, takimi jak testy biochemiczne lub serologiczne..
Błękit laktofenolowy składa się z kwasu mlekowego, błękitu anilinowego, gliceryny, fenolu i wody dejonizowanej. Można go przygotować w laboratorium lub kupić w postaci gotowej do użycia. Po przygotowaniu jest gotowy do użycia, pod żadnym pozorem nie należy go rozcieńczać, ponieważ to działanie da straszne rezultaty.
Stężenie jego składników sprawia, że idealnie nadaje się do barwienia struktur grzybowych, gdyż fenol eliminuje towarzyszącą mu mikrobiotę bakteryjną, a kwas mlekowy tworzy film ochronny wokół struktury grzyba. Wreszcie błękit anilinowy ma powinowactwo do przylegania do struktur grzyba..
Indeks artykułów
W przypadku błękitu laktofenolowego przeprowadza się proste barwienie struktur grzybowych określonej kultury mykologicznej. Nazywa się to prostym, ponieważ używa tylko jednego barwnika.
Błękit laktofenolowy oprócz barwienia działa również odstraszająco na próbkę, dzięki połączonemu działaniu kwasu mlekowego i fenolu dodatkowo fenol zachowuje się jak zaprawa i jednocześnie zapobiega lizie drobnoustroju poprzez hamowanie hydrolitycznej enzymy, które mogą być obecne.
Kwas mlekowy zachowuje natomiast morfologię struktur grzyba.
Z drugiej strony, błękit anilinowy ma właściwość przywierania lub wiązania się ze strukturami zawierającymi chitynę. Struktury barwią się na jasnoniebiesko.
Należy zaznaczyć, że ściana komórkowa mikroorganizmów grzybowych, zwłaszcza pleśni, zawiera chitynę, dlatego barwnik ten jest idealny do barwienia tych mikroorganizmów..
Roztwór błękitu laktofenolowego jest lekko mętnym, lekko mętnym wodnym barwnikiem, silnie kwaśnym, o jasnoniebieskim kolorze. Zachowuje stabilność, jeśli jest przechowywany w temperaturze od 15 ° C do 25 ° C. Butelka musi być dobrze zamknięta. Działa drażniąco i żrąco na skórę i błony śluzowe.
Formuła przygotowania 1 litra błękitu laktofenolowego jest następująca:
-250 g / l kwasu mlekowego
-1,0 g / l błękitu anilinowego lub błękitu metylowego
-500 g / l gliceryny
-250 g / l fenolu
-250 ml wody dejonizowanej lub destylowanej.
Fenol rozpuszcza się we wcześniej ogrzanej wodzie. Kwas mlekowy i gliceryna są dodawane i bardzo dobrze mieszane. W końcu błękit anilinowy rozpuszcza się. Miesza się ponownie i jest gotowy do użycia.
Porcje potrzebne do przygotowania 80 ml roztworu błękitu laktofenolowego to:
-20 g kryształów fenolu
-20 ml kwasu mlekowego
-40 ml gliceryny lub gliceryny
-20 ml wody destylowanej.
Służy do barwienia struktur grzybowych oraz, dzięki cechom morfologicznym obserwowanym na poziomie mikroskopowym, do postawienia przypuszczalnej diagnozy grzyba.
- Pobierana jest czysta kultura grzyba, z której chcesz obserwować jego struktury.
- Zaleca się pracę w okapie z przepływem laminarnym lub pod zapalniczką przy użyciu maski i rękawiczek, ponieważ konieczne jest przestrzeganie norm bezpieczeństwa biologicznego, ponieważ większość pleśni łatwo rozprzestrzenia się w środowisku i dlatego stanowią zagrożenie dla operatora.
- Na szkiełku umieszcza się kroplę błękitu laktofenolowego..
- Mały kwadrat dobrej jakości taśmy klejącej jest odcinany i bardzo dokładnie przyklejany do końca platynowego uchwytu, już wysterylizowanego i zimnego..
- Platynowy uchwyt zbliża się do najbardziej powierzchownej części kolonii grzybów i bardzo ostrożnie dotyka kultury, dokładnie tam, gdzie znajduje się taśma klejąca..
- Następnie przenosi się go na szkiełko i umieszcza tuż nad kroplą błękitu laktofenolowego, uważając, aby taśma była idealnie rozciągnięta i nasmarowana barwnikiem. Platynowy uchwyt jest bardzo delikatnie usuwany.
- Kolejną kroplę błękitu laktofenolowego umieszcza się na taśmie i szkiełku nakrywkowym na wierzchu. Nie wywieraj zbyt dużego nacisku, aby uniknąć zniszczenia struktur grzyba, ponieważ są one wyjątkowo delikatne. Barwnik powinien działać przez około 3 do 4 minut.
- Po tym czasie preparat jest gotowy do obserwacji pod mikroskopem w 10-krotnym lub 40-krotnym powiększeniu. Jeśli wymagana jest obserwacja przy 100X, użyj olejku immersyjnego.
- Struktury grzyba są na ogół zabarwione na niebiesko, z wyjątkiem grzybów dematiaceous, które zachowają swój charakterystyczny brązowy kolor dla tego rodzaju grzybów..
Jeśli wymagane jest badanie bezpośredniej próbki biologicznej, takiej jak między innymi plwocina, ropa, wysięk, wydzielina, to te muszą mieć wcześniejszą procedurę odkażania próbki. W tym celu stosuje się roztwór NaOH.
W przypadku próbek włosów można je farbować bezpośrednio.
Kilka dotkniętych włosów (w sumie 10) pobiera się z przypuszczalnych zmian grzybiczych skóry owłosionej głowy (obszary łysienia) i umieszcza na szkiełku (3 do 4 włosów na szkiełko). Kilka kropli błękitu laktofenolowego umieszcza się na wierzchu i natychmiast przykrywa szkiełkiem nakrywkowym..
Chwyć preparat kleszczami i delikatnie podgrzej nad palnikiem. Aby to zrobić, wykonaj 3 do 4 szybkich przejść przez płomień. Obserwuj mikroskop pod kątem 40X i szukaj zarodników na zewnątrz lub wewnątrz włosa (odpowiednio ectothrix lub endothrix). W razie potrzeby dolej olejku immersyjnego i obserwuj przy 100X.
Po inkubacji domniemanej kultury Candida albicans w surowicy ludzkiej przez 2 do 4 godzin w temperaturze 37 ° C, pobrać porcję roztworu i zabarwić błękitem laktofenolowym. Preparat obserwuje się pod mikroskopem przy 40X. Rurka zarodkowa jest obecna, a blastospory barwią się na jasnoniebiesko.
Krajowe Stowarzyszenie Ochrony Przeciwpożarowej (NFPA) ustanawia kartę charakterystyki substancji chemicznych pod względem ryzyka, jakie ona reprezentuje w różnych aspektach, które są oznaczone kolorowym rombem i liczbą od 0 do 4.
Zagrożenia dla zdrowia zaznaczono kolorem niebieskim, palność kolorem czerwonym, niestabilność lub reaktywność kolorem żółtym, a każde szczególne zagrożenie kolorem białym..
Zagrożenie dla zdrowia, jakie stwarza błękit laktofenolowy zgodnie z NFPA, wynosi 3. Oznacza to, że substancja jest wyjątkowo niebezpieczna w przypadku spożycia lub bezpośredniego kontaktu ze skórą lub błonami śluzowymi..
Jest to substancja silnie żrąca i drażniąca.
W kontakcie ze skórą i błonami śluzowymi powoduje poważne oparzenia.
W przypadku spożycia może powodować ból głowy, dezorientację, senność, utratę przytomności, zatrzymanie oddechu, a nawet śmierć..
Zgodnie z NFPA błękit laktofenolowy ma poziom palności na poziomie 1. Oznacza to, że pali się tylko wtedy, gdy zostanie podgrzany powyżej 94 ° C..
Wymieniony w NFPA na poziomie 0 (zero) pod względem reaktywności. Oznacza to, że nie ma ryzyka reaktywności, czyli jest substancją stabilną chemicznie..
Nie oferuje żadnych dodatkowych specjalnych zagrożeń.
Jeszcze bez komentarzy