Plik bufor fosforanowy, BPS lub sól fizjologiczna buforowa fosforanowa Jest roztworem buforowo-izotonicznym, którego funkcją jest utrzymanie pH i ciśnienia osmotycznego jak najbliżej naturalnego środowiska biologicznego (fizjologicznego). Akronim PBS oznacza sól fizjologiczną buforowaną fosforanem..
PH i osmolarność to dwa bardzo ważne aspekty, które muszą być kontrolowane w niektórych protokołach laboratoryjnych. W przypadku pH istotne jest, aby było ono kontrolowane, zwłaszcza w reakcjach biochemicznych, ponieważ mogą się one różnić lub nie można ich przeprowadzić, jeśli reagenty mają nieodpowiednie pH.
Tymczasem kontrola osmolarności jest niezbędna, zwłaszcza podczas pracy z żywymi komórkami, ponieważ błony plazmatyczne komórek reagują zgodnie ze stężeniem substancji rozpuszczonych, w których się znajdują..
Jeśli komórki zostaną przeniesione do pożywki hipertonicznej, ulegną odwodnieniu, ponieważ gradient wody zostanie przeniesiony na stronę, w której występuje wyższe stężenie substancji rozpuszczonych. Z drugiej strony, jeśli komórki zostaną umieszczone w pożywce hipotonicznej, komórki będą wchłaniać płyn, dopóki nie zostaną poddane lizie..
Dlatego bufor PBS jest używany w protokołach laboratoryjnych, które wymagają konserwacji komórek. in vitro, w ten sposób ogniwa nie zostaną uszkodzone.
PBS składa się z kombinacji soli, takich jak chlorek sodu, fosforan sodu, chlorek potasu i fosforan potasu. Skład PBS może się różnić w zależności od protokołu..
Indeks artykułów
Zasadniczo funkcją buforu fosforanowo-solnego jest utrzymywanie stałego fizjologicznego pH wraz z stężeniem elektrolitu podobnym do tego występującego w organizmie..
W takim środowisku komórki mogą pozostać stabilne, ponieważ warunki fizjologiczne są symulowane w jak największym stopniu..
W razie potrzeby do oryginalnego preparatu PBS można dodać inne związki, na przykład dodanie EDTA do buforu jest przydatne do przemywania czerwonych krwinek w teście krzyżowej niezgodności..
EDTA zapobiega rozszczepianiu i lizie frakcji dopełniacza C1 obecnego w surowicy do czerwonych krwinek, to znaczy zapobiega fałszywym wynikom niezgodności. Ponadto EDTA pomaga w dysocjacji komórek.
Ilość soli, które należy odważyć, aby przygotować roztwór soli fizjologicznej buforowanej fosforanem PBS, będzie zależał od ilości, którą należy przygotować:
Na jeden litr roztworu:
Ważyć:
80,6 g NaCl,
2,2 g KCl,
11,5 g NadwaHPO4,
2,0 g KHdwaHPO4
Umieść ciężkie sole w zlewce, dodaj wystarczającą ilość wody (80%) i wymieszaj na płycie mieszającej za pomocą pręta magnetycznego, aż sole się rozpuszczą..
Filtruj, aby usunąć nierozpuszczone cząsteczki. Używać filtrów o porach 0,45 µm. Autoklawuj i aseptycznie rozprowadź w wyciągu laminarnym w szklanych słoikach z pokrywkami.
Roztwór 10X (stężony) nie reguluje pH. Korektę przeprowadza się po rozcieńczeniu do stężenia buforu 1X PBS (rozcieńczenie 1:10).
1X PBS można przygotować bezpośrednio, odważając odpowiednie ilości każdej soli, lub można go przygotować przez rozcieńczenie roztworu podstawowego (1:10) jałową wodą destylowaną..
-Aby bezpośrednio przygotować 1 litr soli fizjologicznej buforowanej fosforanem 1X PBS, zważ:
8,06 g NaCl,
0,22 g KCl,
1,15 g NadwaHPO4,
0,20 g KHdwaHPO4
Postępuj tak, jak wyjaśniono dla stężonego roztworu. Następnie należy dostosować pH. Aby to zrobić, zmierz pH iw zależności od wyniku użyj kwasu (HCl) lub zasady (NaOH), aby odpowiednio obniżyć lub podnieść pH, aż do 7,4.
Kwas lub zasadę dodaje się kropla po kropli, monitorując wartość pH roztworu za pomocą pH-metru. Przefiltrować, autoklawować i aseptycznie rozprowadzić do stożkowych probówek lub słoików, w zależności od potrzeb.
-Aby przygotować 1X PBS z roztworu podstawowego 10X:
Rozcieńczyć w stosunku 1:10. Na przykład, aby przygotować 1 litr 1X PBS, odmierz 100 ml roztworu podstawowego i dodaj 700 ml sterylnej wody destylowanej. Wyreguluj pH i uzupełnij ilość wody do 1000 ml.
Przygotowany bufor PBS jest bezbarwny i przezroczysty.
Codzienny PBS można przechowywać w temperaturze pokojowej, a resztę w lodówce.
Na 100 ml 1 molowego HCL (kwas solny).
Odmierz 91 ml wody destylowanej i umieść ją w zlewce o pojemności 250 ml.
Odmierz 8,62 ml stężonego HCl i dodaj powoli do zlewki zawierającej wodę (nigdy nie rób tego odwrotnie). Podejmij odpowiednie środki bezpieczeństwa biologicznego podczas pracy z silnymi kwasami (substancją silnie żrącą).
Mieszać przez 5 minut, najlepiej za pomocą płytki do mieszania z prętem magnetycznym wewnątrz szklanki. Przenieść do balonu o pojemności 100 ml i dopełnić do 100 ml za pomocą H.dwaLub destylowana.
Na 100 ml NaOH (wodorotlenek sodu) 10 mol.
Odmierz 40 ml wody destylowanej i umieść ją w zlewce o pojemności 250 ml. Odmierz 40 g NaOH i dodaj do wody. Mieszać za pomocą płytki do mieszania z prętem magnetycznym wewnątrz szklanki.
Przenieść do 100 ml kolby miarowej i uzupełnić do kreski wodą destylowaną. Przestrzegaj przepisów bezpieczeństwa biologicznego, ponieważ ta reakcja jest egzotermiczna (uwalnia energię w postaci ciepła).
Jeśli chcesz przygotować inne ilości roztworu soli fosforanowej, możesz zapoznać się z poniższą tabelą:
Stosowany głównie w biologii komórki, immunologii, immunohistochemii, bakteriologii, wirusologii i laboratoriach badawczych.
Idealnie nadaje się do przemywania komórek przez wirowanie (krwinki czerwone), przemywania pojedynczej warstwy komórek, w spektroskopowych technikach elipsometrii, w ilościowym oznaczaniu biofilmów bakteryjnych, w utrzymywaniu kultur komórkowych pod kątem wirusów, jako roztwór do przemywania w technice immunofluorescencji pośredniej. Oraz w technikach charakteryzacji przeciwciał monoklonalnych.
Służy również do transportu komórek lub tkanek, jako rozcieńczalnik do zliczania komórek, przygotowania enzymów komórkowych (trypsyny), jako rozcieńczalnik do metody osuszania biomolekuł oraz do przygotowania innych odczynników..
Z drugiej strony Martin i wsp. W 2006 roku wykazali, że PBS jest przydatny w laboratoriach kryminalistycznych, szczególnie w odzyskiwaniu nasienia z wymazów z pochwy lub w odzyskiwaniu komórek pochwy z rozmazów prącia. W ten sposób można ustalić, czy miał miejsce związek seksualny.
-Niektóre bufory PBS zawierają substancję zwaną azydkiem sodu jako konserwant. Związek ten może wytwarzać substancje wybuchowe, jeśli wejdzie w kontakt z ołowiem lub miedzią. Z tego powodu należy zachować szczególną ostrożność podczas usuwania tego odczynnika do kanalizacji. Jeśli zostanie usunięty w ten sposób, należy dodać dużo wody, aby go jak najbardziej rozcieńczyć..
-Nie należy dodawać cynku do buforu fosforanowego, ponieważ powoduje to wytrącanie się niektórych soli.
-Wangen i wsp. W 2018 roku ustalili, że stosowanie PBS nie nadaje się do przemywania komórek pierwotnej ostrej białaczki szpikowej (AML) ekstrahowanych z krwi obwodowej, ze względu na fakt, że wiele komórek jest traconych w wyniku lizy, przy dużym spadku zawartości białka.
Dlatego ustalili, że pierwotne komórki AML nie powinny być przemywane PBS po przechowywaniu w ciekłym azocie..
Jeszcze bez komentarzy