Plik reakcja ksantoproteinowa to procedura chemiczna stosowana do określenia obecności lub braku aminokwasów aromatycznych, takich jak tyrozyna i tryptofan, które mogą występować w postaci wolnej lub stanowić rozpuszczalne białka, peptydy lub polipeptydy.
Został również wykorzystany do wykrywania toksycznych substancji we krwi, które zawierają grupę benzenu w swojej strukturze. Ten test jest również znany jako reakcja Bechera na ksantoproteinę..
Reakcja ksantoproteinowa wykorzystuje stężony kwas azotowy, ciepło i neutralizującą zasadę. Jeśli roztwór zmieni kolor z żółtego na pomarańczowy po zneutralizowaniu reakcji, wynik testu uznaje się za pozytywny. Obserwowane zabarwienie spowodowane jest tworzeniem się związków azotu pochodzących z nitryfikacji grup benzenowych.
Jeśli ilość białka całkowitego wymaga oznaczenia ilościowego, konieczne jest zastosowanie innych metod oznaczania białka, takich jak Biuret..
Reakcja ksantoprotein jest wykorzystywana głównie wtedy, gdy analizowane są substancje o nieznanym składzie chemicznym. Ta reakcja jest zwykle częścią zestawu testów, które pomogą określić skład chemiczny określonej substancji lub ekstraktu. Dlatego jest szeroko stosowany przez badaczy.
Z drugiej strony reakcja ksantoproteinowa Bechera służy do wykrywania substancji fenolowych i indolowych we krwi, dzięki czemu można przewidzieć wystąpienie nefropatii, zanim inne późniejsze parametry zostaną zwiększone..
Indeks artykułów
Reakcja zasadniczo wykrywa obecność grupy benzenowej, zarówno w aminokwasach, jak również w białkach i peptydach. Kwas azotowy działa na pierścień benzenowy aminokwasów, które go posiadają, tworząc nitrozwiązki fenolowe.
Reakcja wymaga ciepła, generalnie tworzy się osad, który zmętnia medium, nadając mu mleczny kolor. Osad może być biały lub żółty. Wreszcie, wymaga etapu alkalizacji, który uwydatnia kolor. W tym celu stosuje się zasadę, taką jak 40% wodorotlenek sodu lub amoniak..
Reakcja zostanie zinterpretowana jako pozytywna, jeśli zaobserwuje się silne żółte zabarwienie podczas procesu ogrzewania lub ciemnopomarańczowe, gdy reakcja alkalizuje się. Wykrywane przez nią aminokwasy to głównie tyrozyna i tryptofan.
W przypadku fenyloalaniny, mimo że jest to aminokwas aromatyczny, jądro benzenowe tego aminokwasu jest trudne do azotowania w prostej reakcji, dlatego będzie emitował reakcję ujemną lub słabo dodatnią..
Ogólnie rzecz biorąc, test ksantoproteinowy można uzupełnić testem Hopkinsa-Cole'a, który służy do specyficznej identyfikacji tryptofanu. Jeśli wynik testu ksantoprotein jest dodatni, a test Hopkinsa-Cole'a ujemny, wyklucza się obecność tryptofanu w tym roztworze, wskazując na obecność głównie tyrozyny. Podobnie można go uzupełnić, między innymi, reakcją Millona do wykrywania tyrozyny..
Reakcję tę można również zastosować na próbkach krwi, osocza lub odsalanej surowicy w celu diagnozy mocznicy lub niewydolności nerek. W tym przypadku poszukiwane jest wykrywanie substancji toksycznych (fenolowych i indolowych) powstających w wyniku gnicia jelit..
Substancje te mają grupę benzenową i dlatego dają dodatnią reakcję ksantoprotein, mimo że reagująca substancja nie jest ani aminokwasem, ani białkiem..
Umieść 1 ml badanej próbki w czystej, suchej probówce.
-Dodać 0,5 ml stężonego kwasu azotowego.
-Inkubować mieszaninę w łaźni wodnej o temperaturze 70 ° C przez 2 minuty. Wcześniej przygotuj kąpiel wodną o podanej temperaturze.
-Podczas wyjmowania probówki z łaźni wodnej można zauważyć, że roztwór stał się mleczny i przybrał pewien żółtawo-biały kolor..
-Roztwór schładza się, upuszczając zimną wodę u podstawy rurki..
-Preparat alkalizuje się przez powolne dodawanie (kropla po kropli) 40% roztworu wodorotlenku sodu, aż do zmiany koloru.
-Jeśli wynik testu będzie pozytywny, na granicy faz cieczy utworzy się ciemnopomarańczowy pierścień..
-Jeśli reakcja jest negatywna, zabarwienie nie wystąpi.
-Dozuj 5 cm3 20% kwasu trichlorooctowego na 5 cm3 krwi żylnej, osocza lub surowicy, przy czym ta ostatnia jest najbardziej wskazana. Dobrze wymieszaj i przefiltruj.
-Pobiera się 2 ml przesączu i miesza z 0,5 ml kwasu azotowego. Następnie jest podgrzewany do wrzenia, w tym celu rurkę umieszcza się bezpośrednio nad jaśniejszym płomieniem na 30 sekund. Chłodzi się wodą i dodaje 1,5 33% chlorku sodu..
Jest interpretowany w następujący sposób:
-Wynik negatywny: kolor żółtawy.
-Wynik pozytywny (+) cytrynowy żółty.
-(++) złocistożółty.
-(+++) ciemnożółty do brązowego
Można to również zinterpretować za pomocą referencyjnej skali kolorymetrycznej Autenrietha, składającej się z różnych stężeń dichromianu potasu. Przygotowuje się go w 10 w 10 rozcieńczeniach z 0,03874% roztworu podstawowego. Każda probówka reprezentuje procent.
Istnieją dwie skale interpretacji, zwane starożytnymi i współczesnymi. Normalne wartości to:
Stara tabela: od 75 do 85%
Nowoczesny stół: od 15 do 25%
Jeśli kolor probówki jest pośrodku dwóch standardowych probówek, pomiędzy dwoma pomiarami obliczana jest średnia.
Roztwór wzorcowy dichromianu potasu przygotowuje się w następujący sposób: odmierza się 7,9 ml 10 N dichromianu potasu i uzupełnia do 100 ml w kolbie miarowej. W przypadku rozcieńczeń postępować zgodnie z tabelą kolorymetryczną Autenrieth..
Zastosowanie reakcji ksantoproteinowej jest częścią zestawu testów biochemicznych, które pomagają poznać skład chemiczny jakiejś nieznanej substancji. Test ten przyczynia się do analizy chemicznej wykrywania białek zawierających w swojej strukturze grupy benzenowe..
Ta reakcja jest szeroko stosowana przez badaczy w różnych badaniach interesujących substancji..
W tym sensie Vásquez-Jorge i współpracownicy wykorzystali tę i inne reakcje do zbadania zawartości białka w płynach wyekstrahowanych z ostryg mangrowych. (Crassostrea rhizophorae).
Podobnie Rojas i wsp. (2009) zastosowali serię testów, w tym reakcję ksantoproteinową, do analizy glikomakropeptydów w wytrąceniach serwatki ricotta..
Z drugiej strony reakcja ksantoproteiny Bechera została zmodyfikowana przez Volharda w celu wykorzystania jej do innych celów. W tym przypadku do wykrywania substancji fenolowych i indolowych, które mogą wzrosnąć znacznie wcześniej (tygodnie lub miesiące), zanim wzrośnie poziom mocznika i resztkowego azotu we krwi..
Te toksyczne odpady powstają w wyniku rozkładu pokarmu w jelitach.
Substancje te gromadzą się we krwi, gdy nie są prawidłowo wydalane, dlatego dodatni wynik testu ksantoprotein może przewidywać wczesny początek właściwej niewydolności nerek lub stan mocznicy..
W zależności od intensywności koloru możesz określić, jak bardzo jest zaawansowany. W tym przypadku test jest ilościowy.
U zdrowych osób test ten daje lekko żółty kolor, odpowiadający normalnemu poziomowi tryptofanu i tyrozyny, które mogą znajdować się we krwi.
Natomiast u chorych na nerki reakcja ksantoproteinowa jest silnie dodatnia ze względu na obecność m.in. fenolu, indolu, parakrezolu, aromatycznych kwasów tlenowych..
Ten test musi być wykonany przez przeszkolonych specjalistów. Należy wziąć pod uwagę wszystkie przepisy dotyczące bezpieczeństwa biologicznego, ponieważ stosowane odczynniki to żrące kwasy i zasady..
Jeśli przypadkowo kilka kropli kwasu azotowego spadnie na skórę lub paznokcie, zżółkną, ponieważ obie struktury zawierają białka. Ponadto na skórze i błonach śluzowych powoduje poważne oparzenia.
Jeśli dojdzie do kontaktu ze skórą, należy postępować zgodnie z protokołem natychmiastowego przemywania miejsca wodą z mydłem przez około 20 minut..
Jeśli dostanie się do oczu, należy je przemyć dużą ilością świeżej wody, starając się mieć otwarte oczy..
Jeszcze bez komentarzy