Plik Odczynnik Benedykta to niebieskawy roztwór miedzi, który służy do wykrywania obecności cukrów redukujących: aldehydów, alfa-hydroksy-ketonów i hemicetali. Został opracowany przez Stanleya R. Benedicta (1884-1936).
Cukry alfa-hydroksy-ketony charakteryzują się tym, że w sąsiedztwie ketonu znajdują się grupa hydroksylowa. Tymczasem hemiketal to związek powstający w wyniku dodania alkoholu do aldehydu lub ketonu. Odczynnik Benedicta reaguje bezkrytycznie ze wszystkimi tymi cukrami redukującymi.
Metoda Benedykta opiera się na redukcyjnym działaniu cukrów na Cudwa+, o niebieskim zabarwieniu, które przekształca je w Cu+. CU+ tworzy ceglastoczerwony osad tlenku miedziawego. Jednak w zależności od stężenia cukrów pojawia się spektrum kolorów (górne zdjęcie).
Należy zwrócić uwagę, że jeśli odczynnik Benedicta zostanie dodany do probówki bez cukrów redukujących (0%), nie ulegnie on żadnej zmianie w swoim niebieskawym kolorze. Tak więc, gdy stężenie jest wyższe niż 4%, probówka jest zabarwiona na brązowo..
Indeks artykułów
Odczynnik został stworzony przez amerykańskiego chemika Stanleya Rossitera Benedicta w 1909 roku, który opublikował swoją pracę naukową Odczynnik do wykrywania cukrów redukujących, w czasopiśmie J. Biol. Chem.
Ponadto Lewis i Benedict (1915) opublikowali metodę oznaczania cukrów redukujących we krwi, wykorzystując pikrynian jako wskaźnik; ale przestał być używany z powodu braku specyficzności.
Odczynnik Benedykta jest bardzo podobny do odczynnika Fehlinga. Różnią się tym, że Benedykt używa jonu cytrynianowego i soli węglanu sodu; podczas gdy Fehling wykorzystuje jon winianowy i wodorotlenek sodu.
Test Benedykta ma charakter jakościowy, to znaczy wykrywa tylko obecność cukrów redukujących. Jednak odczynnik Benedicta może być ilościowy, jeśli zawiera tiocyjanian potasu w roztworze, który tworzy biały osad tiocyjanianu miedzi, który można miareczkować za pomocą wzorców glukozy..
Odczynnik Benedict jest nadal używany do wykrywania obecności glukozy w moczu i wskazuje na chorobę cukrzycową u pacjenta, którego mocz jest poddawany testowi lub testowi Benedicta. Nie można jednak wykluczyć, że cukromocz ma inne pochodzenie.
Na przykład, zwiększony cukromocz stwierdza się w stanach takich jak: ciąża, pierwotna glukozuria nerkowa, kwasica kanalikowa nerkowa, pierwotny lub wtórny zespół Fanconiego, hiperaldosteronizm i ostre zapalenie trzustki lub rak trzustki..
Odczynnik Benedykta jest niebieski z powodu obecności Cudwa+, który jest zredukowany do Cu+ przez działanie cukrów redukujących; w tym przypadku glukoza, tworząc ceglastoczerwony osad tlenku miedzi (I).
Zabarwienie i tworzenie się osadu w teście Benedykta zastosowanym do moczu różni się w zależności od stężenia cukru redukującego. Jeśli stężenie glukozy w moczu jest mniejsze niż 500 mg / dl, roztwór zmienia kolor na zielony i nie tworzy się osad.
Stężenie glukozy w moczu 500 - 1000 mg / dl powoduje zielony osad w teście Benedykta. W stężeniu powyżej 1000 do 1500 mg / dl powoduje tworzenie się żółtego osadu.
Jeśli stężenie glukozy wynosi 1500 - 2000 mg / dl, widoczny będzie pomarańczowy osad. Ostatecznie stężenie glukozy w moczu jest większe niż 2000 mg / dl, co spowoduje powstanie ceglastoczerwonego osadu..
Oznacza to, że test Benedykta ma charakter półilościowy, a wynik jest przedstawiany za pomocą krzyżyków. Tak więc, na przykład, tworzenie się zielonego osadu odpowiada krzyżykowi (+); i powstanie ceglastoczerwonego osadu odpowiada czterem krzyżykom (++++).
Odczynnik Benedicta wykrywa obecność cukrów redukujących, które mają wolną grupę funkcyjną lub wolną ketonową grupę funkcyjną, jako część ich struktury molekularnej. Tak jest w przypadku glukozy, galaktozy, mannozy i fruktozy (monosacharydy), a także laktozy i maltozy (disacharydów).
Sacharoza i skrobia nie reagują z odczynnikiem Benedicta, ponieważ zawierają wolne grupy redukujące. Ponadto istnieją związki, które zakłócają test Benedykta w moczu, dając fałszywie dodatni wynik; tak jest w przypadku salicylanu, penicyliny, streptomycyny, lewodopy, kwasu nalidyksowego i izoniazydu.
W moczu obecne są substancje chemiczne, które mogą zmniejszyć reakcję Benedykta; na przykład: kreatynina, moczan i kwas askorbinowy.
Składniki odczynnika Benedicta to: pentahydrat siarczanu miedzi, węglan sodu, cytrynian trójsodowy i woda destylowana..
Pentahydrat siarczanu miedzi, CuSO45HdwaO, zawiera Cudwa+: jest związkiem, który nadaje odczynnikowi Benedykta jego niebieski kolor. Cukry redukujące działają na Cudwa+, produkując jego redukcję do Cu+ i tworzenie osadu tlenku miedziawego (CudwaO) ceglasty.
Węglan sodu wytwarza środowisko zasadowe, niezbędne do zajścia redukcji miedzi. Węglan sodu reaguje z wodą, tworząc wodorowęglan sodu i jon hydroksylowy OH-, odpowiada za zasadowość ośrodka niezbędną do zajścia procesu redukcyjnego.
Cytrynian sodu tworzy z miedzią (II) kompleks, który zapobiega jego redukcji do Cu (I) podczas przechowywania.
5 ml odczynnika Benedicta umieszcza się w probówce 20 x 160 mm i dodaje do niej 8 kropli moczu. Probówkę delikatnie wstrząsa się i umieszcza w naczyniu z wrzącą wodą na 5-10 minut..
Po tym czasie probówkę wyjmuje się z gorącej kąpieli wodnej, a jej powierzchnię chłodzi się bieżącą wodą, aby na koniec odczytać wynik uzyskany podczas wykonywania testu Benedykta (kolory).
Redukcję Cu (II) podczas testu Benedykta można przedstawić w następujący sposób:
RCHO + 2 Cudwa+ (złożone) + 5 OH- => RCOO- + CudwaO + 3 H.dwaLUB
RCHO = aldehyd; RCOO- = (jon karboksylanowy); CudwaO = tlenek miedziawy, ceglastoczerwony osad.
Odważono 173 gramów cytrynianu sodu i 100 gramów węglanu sodu i rozpuszczono razem w 800 ml ciepłej wody destylowanej. Jeśli zostaną zaobserwowane ślady nierozpuszczonych substancji, roztwór należy przefiltrować.
Z drugiej strony 17,3 grama pentahydratu siarczanu miedziowego rozpuszczono w 100 ml wody destylowanej..
Następnie oba roztwory wodne delikatnie miesza się i kontynuuje ciągłe mieszanie, dopełniając do 1000 ml wodą destylowaną..
Jeszcze bez komentarzy