Plik Bejca Kinyoun to technika barwienia stosowana do barwienia bakterii i pasożytów odpornych na działanie kwasu. Narodził się z modyfikacji zabarwienia Ziehl-Neelsen; Obie techniki są interpretowane w ten sam sposób, ale różnią się dwoma elementami: w przygotowaniu głównego odczynnika oraz tym, że technika Kinyoun nie wykorzystuje ciepła.
Z tego powodu jest również znany jako zimna bejca modyfikowana Ziehl-Neelsen lub Kinyoun. Jest wskazany do barwienia Prątek gruźlicy, Mycobacterium leprae, nietypowe prątki, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris Y Cyclosporas cayetanensis.
Warto zaznaczyć, że Nocardia słabo wybarwiają się tą techniką, gdyż są częściowo kwasoodporne na alkohol, więc dla tego rodzaju istnieje modyfikacja metodologii.
Z kolei zimna technika Kinyouna została połączona z techniką trójchromową zmodyfikowaną przez Didiera do wykrywania kokcydiów (Cryptosporidium parvum i Isospora belli) i zarodniki mikrosporydiów (Enterocytozoon bieneusi Y Encephalitozoon intestinalis).
Indeks artykułów
Głównym odczynnikiem barwiącym jest fuksyna karbolowa lub fuksyna karbolowa, która ma właściwość wiązania się z kwasami karbolowymi występującymi w woskowej ścianie komórkowej, bogatymi w lipidy (kwasy mykolowe) prątków i niektórych pasożytów..
Kwaśny wybielacz nie przeciwdziała temu wiązaniu; w związku z tym mikroorganizmy określa się jako odporne na kwasy i alkohole.
W przeciwieństwie do techniki Ziehla-Neelsena - która utrwala barwnik na gorąco - w technice Kinyoun ten etap nie jest konieczny, ponieważ roztwór fuksyny karbolu przygotowany do tej techniki zawiera wysokie stężenie fenolu..
Fenol rozpuszcza materiał lipidowy w ścianie komórkowej, umożliwiając wniknięcie barwnika fuksyny karbolowej. Po wniknięciu barwnik pozostaje utrwalony pomimo mycia kwaśnym alkoholem.
W ten sposób mikroorganizmy kwasoodporne nabierają charakterystycznego czerwonego zabarwienia, a wszystko co nie jest kwasoodporne spirytusem, odbarwia się i zabarwia na niebiesko..
- Zmodyfikowana fuksyna karbolowa.
- Kwas alkoholowy.
- Błękit metylenowy.
- Fuksyna podstawowa: 4 gr.
- Fenol: 8 ml.
- Alkohol (95%): 20 ml.
- Woda destylowana: 100 ml.
Podstawową fuksynę należy powoli rozpuszczać w alkoholu, ciągle mieszając. Następnie wykrystalizowany fenol topi się w łaźni wodnej o temperaturze 56 ° C. Po rozpuszczeniu dodaje się 8 ml do przygotowanego powyżej roztworu fuksyny.
- Stężony kwas solny: 3 ml.
- Etanol (95%): 97 ml.
Należy go zmierzyć, połączyć i wymieszać.
- Błękit metylenowy: 0,3 g.
- Woda destylowana: 100 ml.
Jest ważony i rozpuszczany.
1- Przygotuj rozmaz bezpośrednio z próbki, którym może być między innymi plwocina, płyn płucny, osad moczu, płyn mózgowo-rdzeniowy lub kał; lub z zawiesiny mikroorganizmów uzyskanych z czystych kolonii wyhodowanych na pierwotnej pożywce hodowlanej.
2- Napraw rozmaz za pomocą ciepła.
3- Umieść rozmaz na mostku barwiącym i przykryj przygotowanym odczynnikiem Kinyoun carbol fuksin. Pozwól mu odpocząć przez 3 lub 5 minut.
4- Umyć wodą destylowaną.
5- Wybielać kwaśnym alkoholem przez 3 minuty i ponownie przemyć wodą destylowaną.
6- Ponownie wybielać kwaśnym alkoholem przez 1 lub 2 minuty, aż kolor nie zostanie usunięty.
7- Umyć wodą destylowaną i pozostawić do odsączenia, ustawiając szkiełko w pozycji pionowej.
8- Pokryć preparat błękitem metylenowym i odstawić na 4 minuty.
9- Umyć wodą destylowaną i pozostawić do wyschnięcia na powietrzu.
10- Zbadaj przy 40X, a następnie przy 100X.
Jeśli chcesz poprawić i przyspieszyć wybarwienie mikroorganizmów kwasoodpornych, dodaj 1 kroplę środka zwilżającego (takiego jak Tergitol nr 7) do 30 lub 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.
Niektóre laboratoria zmieniają barwnik kontrastowy błękitu metylenowego na jasnozielony lub kwas pikrynowy; pierwsza nadaje tło zielony kolor, a druga generuje kolor żółty.
Aby poprawić wybarwienie bakterii z rodzaju Nocardia, zastosowano modyfikację barwienia Kinyoun. Technika jest następująca:
1- Przykryj rozmaz fuksynem karbolowym Kinyoun przez 3 minuty.
2- Umyć wodą destylowaną.
3- Krótko odbarwić kwaśnym alkoholem przygotowanym na 3%, aż do ustąpienia zabarwienia.
4- Umyć ponownie wodą destylowaną.
5- Przykryć preparat błękitem metylenowym i pozostawić na 30 sekund.
6- Umyć wodą destylowaną i pozostawić do wyschnięcia na powietrzu.
Technika ta jest zalecana do analizy próbek kału pod kątem kokcydiów i zarodników Microsporidium sp w tym samym czasie. Procedura do naśladowania jest następująca:
1- Przykryj rozmaz fuksynem karbolowym Kinyoun na 10 minut.
2- Usuń barwnik i przemyj wodą destylowaną.
3- Wybielać przez 30 sekund alkoholem kwasu solnego.
4- Umyć ponownie wodą destylowaną.
5- Przykryć rozmaz roztworem trichromu na 30 minut w 37 ° C.
6- Umyć wodą destylowaną.
7- Wybielać przez 10 sekund alkoholem kwasu octowego.
8- Płucz rozmaz przez 30 sekund przy użyciu 95% etanolu.
Jako kontrolę pozytywną przygotowuje się rozmazy ze szczepów Prątek gruźlicy i wybarwić przygotowanymi odczynnikami, aby sprawdzić, czy bakterie nabrały odpowiedniego koloru (czerwono-fuksja).
Kontrole negatywne mogą być również użyte do przygotowania rozmazów z dowolnym szczepem, który nie jest kwasoodporny, sprawdzając w ten sposób, czy cała próbka przyjmuje kontrastowy kolor..
Technika Kinyoun jest prostsza, ponieważ eliminuje etap ogrzewania, ale jej główną zaletą jest to, że unika emisji oparów, silnie toksycznych i powodujących raka na dłuższą metę. Dlatego plama Kinyoun jest bezpieczniejsza dla personelu barwiącego..
Należy wziąć pod uwagę, że należy uważać, aby odczynniki nie miały bezpośredniego kontaktu ze skórą, ponieważ działają żrąco, a wybielacz jest łatwopalny..
Jeśli chodzi o wady, negatywny rozmaz niekoniecznie oznacza, że organizm nie jest obecny. Ponadto obecność szczątków komórkowych może prowadzić do fałszywie pozytywnych wyników, co prowadzi do nieporozumień w diagnozie..
Jeszcze bez komentarzy