Plik Plama May Grünwald-Giemsa o Pappenheim to technika barwienia różnicowego, w której miesza się odczynniki Giemsa i May Grünwald. Służy do różnicowania prawidłowych i nieprawidłowych krwinek w rozmazach krwi obwodowej i szpiku kostnego, a także do barwienia skrawków histologicznych i próbek cytologicznych..
Oba odczynniki - Giemsa i May Grünwald - pochodzą z barwienia typu Romanowsky'ego, techniki opartej na połączeniu barwników kwasowych i zasadowych..
Giemsa ulepszył technikę, stabilizując mieszaninę eozyny, błękitu metylenowego i ich pochodnych za pomocą glicerolu. Zamiast tego May Grünwald używa eozyny i błękitu metylenowego, używając metanolu jako rozpuszczalnika. To strategiczne połączenie przyniosło doskonałe rezultaty.
Chociaż pod względem obserwacji morfologii komórki działa podobnie jak barwienie Giemsa i Wrighta, technika ta poprawia poprzednie, udoskonalając barwienie pasożytów wywołujących malarię, chorobę Chagasa, leiszmaniozy i rzęsistkowicę..
Dodatkowo okazała się bardzo przydatną techniką do cytologicznego badania płynu nasiennego. Wyróżnia się nie tylko wykazaniem cech morfologicznych plemników, ale także możliwością różnicowania leukocytów, komórek nabłonka i komórek spermatogenezy z dużą skutecznością..
Indeks artykułów
Technika bazuje na barwieniach Romanowskiego, w których barwniki kwasowe mają selektywne powinowactwo do podstawowych składników komórkowych, a składniki kwasowe przyciągają zabrudzenia zasadowe..
Wyjaśnione w inny sposób, zarówno struktury komórkowe, jak i barwniki mają dodatnie lub ujemne ładunki elektryczne; jak ładunki odpychają się, a różne ładunki przyciągają.
Na przykład podstawowe barwniki, takie jak błękit metylenowy, są naładowane dodatnio i przyciągane do struktur z ładunkiem ujemnym. Dlatego ten barwnik barwi jądra bogate w DNA i RNA, które mają ujemnie naładowane grupy fosforanowe..
Barwione są również ziarnistości podzielonych bazofili i cytoplazmy jednojądrzastych białych krwinek zawierających RNA..
Podobnie kwasowy barwnik ma ładunek ujemny, dlatego wiąże się z dodatnio naładowanymi strukturami, takimi jak erytrocyty i granulki segmentowanych eozynofili. Jeśli chodzi o granulki podzielonych granulocytów obojętnochłonnych, wiążą one oba barwniki.
W tej technice kombinacja reakcji współistnieje między barwnikami ortochromatycznymi i metachromatycznymi. Ortochromaty (eozyna i błękit metylenowy) wiążą się ze strukturą komórkową, z którą są związane i zapewniają stabilny, niezmienny kolor.
Z drugiej strony metachromaty (pochodne błękitu metylenowego lazur A i lazur B) zmieniają swój pierwotny kolor po połączeniu z określoną strukturą, a nawet mogą występować różne odcienie.
Wreszcie krok, jaki podejmuje roztwór May Grünwalda, wymaga obecności wody, ponieważ bez niej barwnik wniknie w struktury, ale nie będzie wiązał. Aby tak się stało, barwnik musi stać się polarny lub jonizować, a tym samym być zdolny do wytrącania się i wiązania się z powiązanymi strukturami..
- Szkiełka mikroskopowe.
- Mosty kolorowania.
- Rozwiązanie May-Grünwalda.
- Plama Giemsa.
- Woda destylowana.
Należy odważyć 0,25 g eozyny i błękitu metylenowego (barwienie według Maya Grünwalda) i rozpuścić w 100 ml metanolu. Następnie preparat miesza się przez 1 godzinę i odstawia na 24 godziny. Kiedy czas minie, przecieka.
Aby zastosować technikę, barwnik May Grünwald należy rozcieńczyć w następujący sposób: na 200 ml rozcieńczonego barwnika odmierzyć 30 ml stężonego roztworu, dodać 20 ml roztworu buforowego i 150 ml wody destylowanej o pH 7,2-7,3. Później jest mieszany i filtrowany.
Odważyć 0,5 g lazurowo-eozynowo-błękitu metylenowego (barwienie wg Giemsy), rozpuścić w 50 ml metanolu i dodać do mieszaniny 50 ml gliceryny.
Aby wykonać technikę, rozcieńcza się go w stosunku 1:10 roztworem buforowym i odstawia na 10 minut. W razie potrzeby można filtrować.
Należy je zważyć:
- 40 mg diwodorofosforanu potasu (KH2PO4).
- 151 mg 12-hydratu wodorofosforanu disodu (Na2HPO4).
Oba związki rozpuszczono w 100 ml wody.
Istnieją dwa tryby: klasyczny i szybki.
Opisane tutaj techniki są wskazówkami, ale należy wziąć pod uwagę, że procedury i czasy barwienia różnią się w zależności od firmy handlowej, która dystrybuuje odczynniki. Wskazane jest, aby postępować zgodnie z krokami ściśle wskazanymi przez każdy dom handlowy.
1- Przykryj rozmaz cienką warstwą roztworu May Grünwald na 4 minuty.
2- Usuń barwnik i przemyj wodą destylowaną.
3- Umieść warstwę rozcieńczonej Giemsy (1:10) w wodzie destylowanej na 15 minut.
4- Usuń barwnik i przemyj wodą destylowaną.
5- Pozostawić do wyschnięcia i obserwować w mikroskopie.
Technika ta wymaga, aby odczynniki i roztwory do przemywania miały pH ustawione na 7,2-7,3, tak aby powinowactwa barwników do struktur komórkowych nie były zniekształcone, a oczekiwany ostateczny kolor nie zmieniał się..
Technika ta jest stosowana w laboratoriach klinicznych do barwienia rozmazów krwi obwodowej i szpiku kostnego, skrawków tkanek i cytologii..
W dziedzinie hematologii technika ta ma zasadnicze znaczenie w badaniu nieprawidłowości komórek pod względem kształtu, wielkości i liczby. Jest to bardzo cenne narzędzie do diagnostyki niektórych chorób, takich jak białaczki i anemie.
Ponadto jest niezwykle przydatny przy poszukiwaniu pasożytów w obszarach hematologicznych (Plasmodium sp Y Trypanosome cruzi) lub histologiczne (Leishmanias sp).
W przypadku cytologii pochwy technika ta jest szczególnie korzystna w obserwacji Trichomonas vaginalis. Jest to ważne odkrycie, ponieważ jego obecność symuluje obrazy raka. in situ które następnie znikają po usunięciu pasożyta.
Jest idealnym narzędziem do badania próbek nasienia, ponieważ dostarcza cennych informacji na temat jakości nasienia.
Dane, które oferuje, dotyczą głównie liczby i morfologii, a także komórek towarzyszących, które mogą być obecne i które mają istotne znaczenie, takich jak komórki rozrodcze, leukocyty i komórki nabłonkowe..
Dzięki tej analizie można opisać nieprawidłowości obserwowane w nasieniu w głowie, szyi, części środkowej i głównej..
Ponadto mogą również pomóc w wykazaniu przypadków hemospermii (obecność czerwonych krwinek w nasieniu) oraz leukospermii lub piospermii (zwiększona liczba leukocytów w nasieniu).
Jeszcze bez komentarzy