Plik Agar sojowy trypticasein lub Trypticase Soy Agar jest stałą, nieselektywną i odżywczą pożywką hodowlaną. Jest oznaczony literami TSA jako akronim w języku angielskim Trypticase Soy Agar. Składa się z tripteiny, peptonu sojowego, chlorku sodu i agaru.
Ze względu na dużą wartość odżywczą idealnie nadaje się do hodowli średnio wymagających i niewymagających mikroorganizmów. Pożywka bez dodatkowych suplementów nie jest zalecana do kultur pierwotnych, ale jest bardzo przydatna między innymi do wyhodowania czystych szczepów i utrzymania ich żywotności..
Agar ten służy również jako podstawa do przygotowania wzbogaconych podłoży, takich jak agar z krwią, zwłaszcza gdy wymagana jest obserwacja wzorców hemolizy i montaż taksonów optochiny i bacytracyny, wymaganych w diagnostyce Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes odpowiednio.
Z drugiej strony, w połączeniu z antybiotykami, przydatne jest izolowanie fakultatywnych i ścisłych mikroorganizmów beztlenowych o znaczeniu klinicznym z próbek o mieszanej florze..
Wreszcie, skład agaru sojowego tryptykazyno-sojowego i jego właściwości spełniają wymagania określone przez różne farmakopee (europejską, japońską i północnoamerykańską)..
Indeks artykułów
Do prawidłowego rozwoju bakterii niezbędna jest obecność źródeł energii, takich jak aminokwasy, witaminy, zasady purynowe i pirymidowe..
W tym sensie tripteina i pepton sojowy dostarczają te składniki odżywcze mikroorganizmom, umożliwiając w ten sposób ich pełny rozwój. Jednak w przypadku wybrednych bakterii konieczne jest uzupełnienie tego agaru odwłóknioną krwią lub krwią podgrzaną w celu zwiększenia jego wzbogacenia..
Z drugiej strony po dodaniu antybiotyków do pożywki staje się ona pożywką selektywną. Możesz również dodać 0,6% ekstraktu drożdżowego, aby sprzyjać izolacji gatunków z rodzaju Listeria, podczas gdy dodatek tellurynu cystyny Y krew jagnięca jest idealna do Corynebacterium diphteriae.
Wreszcie, chlorek sodu zapewnia równowagę osmotyczną pożywce, a agar zapewnia stałą konsystencję..
W celu przygotowania agaru sojowego z tryptykazą należy odważyć 40 g odwodnionej komercyjnej pożywki na wadze cyfrowej. Rozpuszcza się w litrze wody destylowanej zawartej w kolbie.
Mieszaninę odstawia się na 5 minut, a następnie przenosi do źródła ciepła, aby ułatwić rozpuszczenie pożywki. Należy często mieszać i gotować przez 1 lub 2 minuty. Następnie pożywkę sterylizuje się w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.
Pozostawić do ostygnięcia do 50 ° C i rozprowadzić na sterylnych szalkach Petriego. Pozostawić do zestalenia, odwrócić, ułożyć w plisy i przechowywać w lodówce.
Końcowe pH pożywki musi wynosić 7,3 ± 0,2.
Należy zauważyć, że odwodniona pożywka hodowlana jest koloru jasnobeżowego i powinna być przechowywana w temperaturze od 10 do 35 ° C, w suchym miejscu..
Ze swojej strony przygotowany agar ma kolor jasnobursztynowy. Przygotowane płytki należy przechowywać w lodówce (od 2 do 8 ° C) do momentu użycia..
Płytki przed użyciem muszą osiągnąć temperaturę pokojową.
Agar z krwią przygotowuje się przez dodanie 5% odwłóknionej krwi podczas schładzania agaru tryptonowo-sojowego do 50 ° C. Mieszaninę homogenizuje się, obracając delikatnymi ruchami.
Podawać na sterylnych szalkach Petriego. Środkowy kolor powinien być wiśniowy.
Aby przygotować agar z krwią na bazie TSA, należy postępować tak samo, jak procedury już opisane, ale po wyjściu z autoklawu należy pozostawić go w spoczynku, aż temperatura pożywki osiągnie w przybliżeniu od 56 do 70 ° C. W tym czasie krew jest umieszczana i mieszana, aż podłoże stanie się brązowe..
Podawać na sterylnych szalkach Petriego. Kolor podłoża to czekoladowy brąz.
Procedura przygotowania agaru jest taka sama, jak ta opisana dla płytek, z tą różnicą, że zamiast podawać pożywkę na szalkach Petriego, przed sterylizacją rozprowadza się ją między 10 a 12 ml w probówkach z pokrywką bakelitową..
Następnie probówki autoklawuje się w 121 ° C przez 15 minut. Wychodząc, opierają się o podpórkę i pozwalają im zestalić się.
Przygotowane kliny są wysiewane według powierzchni i służą do utrzymania żywotności niektórych niewymagających mikroorganizmów przez określony czas..
Agar Trypticasein Soy Agar jest stosowany w następujących przypadkach:
-Jako baza do przygotowania klasycznego agaru z krwią, który jest rutynowo używany w większości laboratoriów.
-Izolacja wybrednych bakterii.
-Obserwując wzór hemolizy.
-Przeprowadzanie testów diagnostycznych.
-Jako podstawa do przygotowania specjalnego agaru z krwią Corynebacterium diphteriae, z tellurynem cystyny Y krew baranka.
-Jako baza do przygotowania agaru z krwią jagnięcą oraz kanamycyny-wankomycyny do wzrostu beztlenowców, zwłaszcza Bacteroides sp.
-Do pielęgnacji mało wymagających szczepów (Bacterioteca).
-Liczba drobnoustrojów tlenowych w badaniu limitów drobnoustrojów w próbkach wody, środowiska, żywności i kosmetyków.
Próbki można wysiewać bezpośrednio na powierzchnię podłoża Trypticasein Soy Agar z dodatkiem krwi lub innych dodatków. Zasiewa się z wyczerpania.
Natomiast płytki agarowe z tryptykaziną i soją bez dodatków są zwykle używane do subkultury szczepów drobnoustrojów (bakterii lub drożdży)..
W celu sprawdzenia jałowości różnych podłoży przygotowanych z agarem na bazie sojowej tryptykazyny, zaleca się wykonanie następujących czynności: 1 lub 2 niezaszczepione płytki lub probówki z każdej przygotowanej partii należy inkubować w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny w celu wykazania ich jałowości. We wszystkich przypadkach musi pozostać bez wzrostu.
W przypadku stwierdzenia zanieczyszczenia całą partię należy wyrzucić..
Do badania prawidłowego funkcjonowania agaru sojowego z tryptykazą można wykorzystać następujące szczepy bakterii: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 i Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Szczepy wysiewa się i inkubuje w warunkach tlenowych w 37 ° C przez 24 godziny.
We wszystkich przypadkach wzrost musi być zadowalający.
Można również użyć grzybów, takich jak Complex Candida albicans ATCC 10231 i Aspergillus niger ATCC 16404. Oczekuje się dobrego wzrostu dla obu szczepów.
Do sprawdzenia prawidłowego funkcjonowania agaru z krwią przygotowanego na tej podstawie można użyć następujących szczepów: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 i Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Wysiewa się je i inkubuje w temperaturze 37 ° C w warunkach mikroaerofilności przez 24 godziny..
We wszystkich przypadkach wzrost musi być zadowalający, biorąc pod uwagę, że w S. pyogenes powinna być obserwowana beta-hemoliza (wyraźna otoczka wokół kolonii) iu obu szczepów S. pneumoniae należy obserwować hemolizę alfa (zielonkawe otoczki wokół kolonii).
Jeszcze bez komentarzy