Plik Biuret jest odczynnikiem używanym do oznaczania długołańcuchowych i krótkołańcuchowych białek. Jest szczególnie stosowany w chemii analitycznej i analizie moczu do badania stężenia białek całkowitych w surowicy, osoczu i moczu..
W niektórych stanach chorobowych wartości białka mogą ulec zwiększeniu lub zmniejszeniu. Objawy hipoproteinemii występują zwykle u pacjentów z chorobami nerek, u pacjentów niedożywionych oraz u pacjentów z przewlekłymi zakażeniami..
Podczas gdy hiperproteinemię obserwuje się w patologiach, takich jak między innymi szpiczak mnogi, toczeń rumieniowaty układowy, bakteryjne zapalenie wsierdzia, bakteryjne zapalenie opon mózgowych, makroglobulinemia Waldenstroma..
Z drugiej strony obecność białka w moczu wynika z filtracji albuminy przez nerki. Jest to patologiczne zachowanie, które należy zbadać.
W tym sensie Biuret jest bardzo przydatny, ponieważ pozwala na ilościowe określenie obecności białek w surowicy, osoczu, moczu i wielu innych próbkach..
Nawet Biuret może być użyty do badania obecności i stężenia białek w słabo zbadanych próbkach lub próbkach o nieznanym składzie. Dlatego jest szeroko stosowany w obszarze badań.
Test Biuret polega na wykrywaniu wiązań peptydowych. Test odbywa się w środowisku zasadowym. Próbka musi zawierać co najmniej dwa wiązania peptydowe, aby powstał kompleks fioletowo-fioletowy. Kompleks jest tworzony przez połączenie wiązań i jonu miedzi.
Indeks artykułów
Odczynnik Biureta składa się z wodorotlenku potasu, siarczanu miedzi oraz winianu sodu i potasu. Do alkalizacji środowiska stosuje się wodorotlenek sodu, ponieważ warunek ten ma zasadnicze znaczenie dla zajścia reakcji.
Substancje, które reagują z białkami to siarczan miedziowy, podczas gdy winian sodu ma za zadanie nie dopuścić do tworzenia się wodorotlenku miedzi, który ma tendencję do wytrącania się i zakłóca przebieg reakcji..
Jeśli w próbce zostaną znalezione substancje z wiązaniami peptydowymi (polipeptydy lub białka), wynik testu będzie pozytywny.
Reakcja jest interpretowana jako pozytywna, gdy roztwór zmienia kolor na fioletowy. Kolor jest wytwarzany przez tworzenie kompleksu między co najmniej dwoma wiązaniami peptydowymi, które mają grupę CO-NH i kationy miedziowe.
Fioletowy kompleks można utworzyć na dwa sposoby: jeden to utrata protonów z grup amidowych, które wiążą się z metalem (depronotacja), a drugi to połączenie wolnych i wiążących się z miedzią elektronów tlenu i azotu..
Ta reakcja może różnić się intensywnością i kolorem w zależności od rodzaju białka..
Test można przeprowadzić jakościowo lub ilościowo. W formie jakościowej jest zgłaszany jako pozytywny lub negatywny. W postaci ilościowej stężenie można zmierzyć metodą spektrofotometryczną.
Reakcję odczytuje się między 540-560 nm. Intensywność koloru jest wprost proporcjonalna do stężenia wiązań peptydowych w próbce..
-Wodorotlenek sodu (NaOH) 20%
-1% Pentahydrat siarczanu miedzi (CuSO4. 5HdwaLUB)
-Mieszany tetrahydrat winianu sodowo-potasowego (KNaC4H.4LUB64HdwaLUB)
-Musi być przechowywany w lodówce.
-Umieść 100 µl próbki lub wzorca do analizy w probówce.
-Dodać 2 ml wodorotlenku sodu.
-Bardzo dobrze wymieszaj.
-Dodaj 5 ml odczynnika Biuret.
-Wymieszać i odstawić na 25 minut w temperaturze pokojowej, przykryć i chronić przed światłem.
-Obserwuj tworzenie się koloru lub nie i dokonuj pomiarów spektrofotometrycznie.
Albumina surowicy bydlęcej może być stosowana jako wzorzec do wykonania krzywej kalibracji. Przygotowuje się z niego różne stężenia. Na przykład 25, 50, 75, 100, 125 i 150%.
Reakcję przeprowadza się przy wszystkich tych znanych stężeniach i odczytuje się absorbancję przy długości fali 540 nm. Na podstawie danych dotyczących znanych stężeń i odczytów absorbancji sporządza się krzywą kalibracyjną.
W każdym oznaczeniu lub partii przetwarzanych próbek zaleca się zamontowanie wzorca. Albumina surowicy bydlęcej 0,1-2 mg / ml może być stosowana jako wzorzec kalibracyjny..
Pomiary wykonuje się na spektrofotometrze przy 540 nm.
Liniowość jest zachowana do stężenia 12 g / dl.
Chociaż nie jest to bardzo częste, należy zauważyć, że niektóre substancje mogą przeszkadzać podczas wykonywania tego testu. Na przykład obecność amoniaku może hamować powstawanie koloru.
Podobnie inne substancje mogą absorbować na tej samej długości fali, na przykład niektóre pigmenty..
Z drugiej strony interferencja może powstać, gdy substancja inna niż wiązanie peptydowe tworzy kompleks z solą miedziową. Przykład: niektóre węglowodany i określone lipidy.
Jeśli próbka do analizy zawiera jakiś rodzaj osadu, należy go przefiltrować lub odwirować przed zamontowaniem testu..
Na test nie ma wpływu obecność:
-Bilirubina do stężenia 20 mg / dl.
-Hemoglobina do stężenia 750 mg / dl.
-Dekstran do stężenia 30 g / l.
-Trójglicerydy do stężenia 4000 mg / dl.
-Jest to prosta metoda wykonania.
-To test ekonomiczny.
-Posiada wysoką specyficzność wobec białek.
-Mała ingerencja.
Ma słabą czułość do wykrywania małych ilości białka. Prace przeprowadzone przez Fuentes i współpracowników potwierdzają, że metoda testu Biuret ma granicę wykrywalności 1 mg / ml białka i granicę oznaczalności 3 mg / ml.
Jednak inne badania przeprowadzone na Uniwersytecie Amazonii podają znacznie niższe wartości. Podana w badaniu granica wykrywalności wynosi 0,020 mg / ml, a granica oznaczalności wynosi 1,33 mg / ml..
Odczynnik lub test Biuret służy do oznaczania białek w próbkach klinicznych i nieklinicznych w laboratoriach rutynowych i badawczych.
W wielu patologiach ważne jest określenie stężenia białek całkowitych w próbkach klinicznych, które może być wysokie lub niskie.
Są wyniesieni w:
-Szpiczak mnogi,
-Toczeń rumieniowaty układowy,
-Bakteryjne zapalenie wsierdzia,
-Bakteryjne zapalenie opon mózgowych,
Między innymi makroglobulinemia Waldenstroma.
Zmniejsza się w:
-Niewydolność nerek,
-Osoby ze znacznym stopniem niedożywienia,
-Pacjenci z przewlekłymi infekcjami m.in..
Najczęstsze próbki kliniczne to surowica, osocze i mocz. Prawidłowa wartość białek w surowicy lub osoczu wynosi 6,0-8,8 gr / dl.
Stężenie białka w moczu u dorosłych nie przekracza 150 mg / dobę.
Niemowlęta: < a 0,50 mg
Dzieci w wieku 2 lat i starsze: indeks: 0,20 mg
Dorośli ludzie: < 0,2 mg
Reakcja Biuret może być stosowana do wielu rodzajów próbek nieklinicznych, takich jak produkty mleczne, antytoksyna lub dowolna nieznana substancja, w przypadku której chcesz zbadać obecność białek..
Jeszcze bez komentarzy