Plik Agar EMB jest selektywną i zróżnicowaną stałą pożywką hodowlaną stosowaną do izolacji pałeczek Gram-ujemnych, głównie z rodziny Enterobacteriaceae, oraz innych niewymagających wyborów pałeczek Gram-ujemnych. Jest również znany pod akronimem EAM, który oznacza eozynę-błękit metylenowy..
Podłoże to zostało stworzone przez Holt-Harris i Teague w 1916 roku. Zawiera pepton, laktozę, sacharozę, fosforan dipotasowy, agar, eozynę, błękit metylenowy i wodę. Jest bardzo podobny do MacConkey Agar, szczególnie w przypadku stosowania Levine's Modified EMB Agar, który nie zawiera sacharozy.
W rzeczywistości każde laboratorium decyduje, czy pracować z jednym, czy z drugim, ponieważ spełniają tę samą funkcję, chociaż biochemicznie są różne..
Ma nawet tę samą wadę, co klasyczny agar MacConkey, jeśli chodzi o produkcję rojową przez rodzaj Proteus. Dlatego, aby uniknąć tego zjawiska, stężenie agaru można zwiększyć nawet o 5%..
Indeks artykułów
Agar EMB jest subtelnie selektywny, ponieważ zawiera barwniki anilinowe (eozynę i błękit metylenowy), które działają jak inhibitory, zapobiegając rozwojowi większości bakterii Gram-dodatnich i niektórych wybrednych pałeczek Gram-ujemnych..
Jednak ten agar ma tę wadę, że niektóre bakterie Gram-dodatnie są odporne na obecność substancji hamujących i rosną jako małe, bezbarwne, punktowe kolonie, takie jak Enterococcus faecalis a niektóre Staphylococcus.
Mogą również rosnąć niektóre drożdże, takie jak Kompleks Candida albicans, co da bardzo małe różowe kolonie. Chlamydospory mogą nawet rozwinąć się z tych drożdży, jeśli próbka jest głęboko zaszczepiona..
Z drugiej strony agar EMB jest również pożywką różnicową, ponieważ te barwniki razem (eozyna i błękit metylenowy) mają właściwość tworzenia osadu przy kwaśnym pH, dlatego służą jako wskaźniki jego wytwarzania..
Tak więc bakterie słabo fermentujące laktozę lub sacharozę wytwarzają fioletowe kolonie w ciągu 24 do 48 godzin. Na przykład rodzaje Klebsiella, Enterobacter i Serratia.
Bakterie, które silnie fermentują laktozę, np Escherichia coli, lub sacharoza Yersinia enterocolitica lub Proteus penneri, tworzą zielonkawo-czarny osad, nadający charakterystyczny metaliczny połysk u tych gatunków.
Należy zauważyć, że w przypadku stosowania pożywki z lewiną EMB (bez sacharozy), Yersinia enterocolitica Y Proteus penneri dadzą wyraźne kolonie.
Bakterie, które nie fermentują laktozy lub sacharozy, odżywiają się obecnością peptonów, które dostarczają aminokwasów i azotu niezbędnych do wzrostu bakterii i tworzą klarowne kolonie. Na przykład między innymi rodzaje Salmonella i Shigella.
Podobnie należy zauważyć, że rodzaj Acinetobacter może tworzyć kolonie o barwie lawendowo-błękitnej, mimo że nie jest to fermentator laktozy ani sacharoza, ale ma właściwość wiązania błękitu metylenowego na ścianie komórkowej. Może się to również zdarzyć w przypadku innych bakterii oksydacyjnych.
Oryginalne odwodnione podłoże jest koloru jasnobeżowego.
Aby przygotować tę pożywkę hodowlaną, 36 gramów odwodnionej pożywki należy zważyć i zawiesić w kolbie zawierającej 1 litr wody destylowanej..
Po odstawieniu mieszaniny na 5 minut, przenieść kolbę do źródła ciepła, energicznie i stale mieszając, aż się zagotuje i całkowicie się rozpuści..
Następnie już rozpuszczoną pożywkę hodowlaną należy wyjaławiać w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut..
Pod koniec czasu jest wyjmowany z autoklawu i pozostawiany na chwilę w spoczynku. Następnie, jeszcze ciepły (45–50 ° C), podaje się 15–20 ml agaru na każdą sterylną szalkę Petriego. Medium powinno być lakmusowo niebieskie.
Po serwowaniu płytki pozostawia się lekko odkryte, aż agar nieco ostygnie. Następnie przykrywa się je i pozostawia do całkowitego zestalenia. Następnie zamawia się je w odwróconych uchwytach na płytki i przechowuje w lodówce (8 ° C) do czasu użycia..
Ta procedura jest korzystnie przeprowadzana w okapie z przepływem laminarnym lub przed palnikiem Bunsena, aby uniknąć zanieczyszczenia.
Należy pamiętać, że każdy dom handlowy wskaże ilość do zważenia w celu przygotowania pożywki hodowlanej..
Końcowe pH pożywki musi wynosić 7,2 ± 0,2
Podłoże to służy do wysiewu moczu i kału lub dowolnego rodzaju materiału klinicznego, zwłaszcza jeśli podejrzewa się obecność niewymagających bakterii Gram-ujemnych, takich jak pałeczki z rodziny Enterobacteriaceae, które bardzo dobrze rosną na tym podłożu..
Bakterie enteropatogenne z rodzajów Shigella i Salmonella wyróżniają się bezbarwnymi lub lekko bursztynowymi koloniami.
Rosną również inne pałeczki niefermentujące laktozy, takie jak między innymi Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..
Pożywka ta jest również bardzo przydatna w analizie mikrobiologicznej żywności i wody, ponieważ jest idealna do pełnej fazy potwierdzającej oznaczanie bakterii z grupy coli, to znaczy do potwierdzenia obecności bakterii z grupy coli. E coli z mętnych bulionów EC, z techniki najbardziej prawdopodobnej liczby (MPN).
Aby sprawdzić, czy świeżo przygotowana pożywka działa dobrze, można posadzić szczepy kontrolne, aby obserwować cechy kolonii i sprawdzić, czy dają zgodnie z oczekiwaniami..
W tym celu szczepy ATCC lub dobrze zidentyfikowane szczepy E coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa i niektóre bakterie Gram-dodatnie, takie jak S. aureus.
Oczekuje się, że E coli Tworzą dobrze rozwinięte niebieskawo-czarne kolonie z zielonym metalicznym połyskiem. Podczas, Enterobacter aerogenes Y Klebsiella sp powinny dawać dobrze rozwinięte niebieskawo-czarne kolonie śluzowe.
Ze swojej strony, Salmonella typhimurium Y Shigella flexneri, powinny tworzyć duże, bezbarwne lub lekko bursztynowe kolonie.
Wreszcie gatunek Pseudomonas aeruginosa rośnie jako bezbarwne kolonie o nieregularnych rozmiarach, podczas gdy bakterie Gram-dodatnie powinny być całkowicie zahamowane lub rosnąć rzadko przy bardzo małych koloniach.
Czasami sterylizacja powoduje redukcję błękitu metylenowego, uzyskując średnio pomarańczowy kolor. Aby błękit metylenowy utleniał się i odzyskał purpurowy kolor, należy go delikatnie mieszać, aż do odzyskania koloru..
Ponadto po sterylizacji barwnik może wytrącić się, dlatego należy go dobrze wymieszać przed podaniem na szalkach Petriego..
Jeszcze bez komentarzy