Plik agar z solą i mannitolem lub solony mannitol jest stałą, selektywną i zróżnicowaną pożywką hodowlaną. Został stworzony przez Chapmana w szczególności do izolacji patogennych ziarniaków Gram-dodatnich Staphylococcus aureus.
Jednak jest również przydatny do izolowania Staphylococus epidermidis, które czasami mogą występować jako patogen oportunistyczny i Staphylococcus saprophyticus, rozpoznany patogen układu moczowego, między innymi.
Niektóre Enterococcus są zdolne do wzrostu na tym podłożu, jak również niektóre pałeczki Gram-dodatnie tworzące przetrwalniki..
Pożywka ta jest bardzo przydatna w analizie próbek klinicznych, ale znajduje również zastosowanie w badaniach mikrobiologicznych żywności oraz w kontroli jakości produktów przemysłowych, takich jak m.in. kosmetyki, leki..
Słony agar z mannitolem składa się z ekstraktów i peptonów z wołowiny, tripteiny, mannitolu, chlorku sodu, czerwieni fenolowej i agaru.
Indeks artykułów
Agar z mannitolem jest selektywny dzięki wysokiemu stężeniu soli. Zasolenie działa hamująco i zapobiega rozwojowi bakterii Gram-ujemnych.
Różni się również ze względu na obecność mannitolu węglowodanowego i wskaźnika pH czerwieni fenolowej. Z tego powodu bakterie zdolne do fermentacji mannitolu wytwarzają kwasy, zakwaszając pożywkę, powodując żółknięcie kolonii i pożywki..
Z drugiej strony kolonie, które nie fermentują mannitolu, rosną w pożywce, pobierając składniki odżywcze dostarczane przez ekstrakty mięsne oraz peptony i tripteinę. Stamtąd bakterie pobierają węgiel, azot, witaminy i minerały niezbędne do ich wzrostu..
W tym przypadku kolonie mogą być słabe lub mocno różowe, a podłoże zachowuje ten sam kolor lub zmienia się w fuksję.
Agar to substancja zapewniająca konsystencję pożywce.
Aby przygotować jeden litr agaru ze słonym mannitolem, odważa się 111 g odwodnionej pożywki z preferowanej firmy handlowej i rozpuszcza w 1000 ml wody destylowanej za pomocą kolby..
Ciepło jest doprowadzane z częstym mieszaniem medium, aby poprawić proces rozpuszczania. Gotować przez minutę.
Umieścić kolbę w autoklawie w 121 ° C na 15 minut.
Pod koniec czasu kolbę wyjąć z autoklawu, odstawić na odpoczynek i podawać od 15 do 20 ml na sterylnych płytkach Petriego, gdy temperatura wynosi około 50 do 55 ° C..
Dopuszcza się krzepnięcie, zamawiając w odwrotnej kolejności w plaqueros i przechowując w lodówce do czasu użycia. Przed wysianiem próbki poczekaj, aż płytka osiągnie temperaturę pokojową.
Płytki wysiewa się przez posiew pasmowy lub wysiew powierzchniowy szpatułką drigalskiego. Końcowe pH przygotowanej pożywki musi wynosić 7,4 ± 0,2
Odwodnione podłoże ma kolor jasnobeżowy, a przygotowane podłoże pomarańczowoczerwone.
Ze względu na wysoką selektywność podłoże to jest idealne do wysiewu próbek z mieszaną florą, w których chcesz szukać obecności Staphylococus aureus, jako główny patogen tego rodzaju.
W tym sensie jednym z jego najczęstszych zastosowań jest analiza mikrobiologiczna wysięku z gardła i wydzieliny z nosa, zwłaszcza w celu wykrycia bezobjawowych nosicieli S. aureus.
Niektóre kraje wprowadziły tę analizę jako obowiązkowy wymóg dla osób, które chcą pracować jako sprzedawcy żywności..
Ta kontrola zapobiega zatrudnianiu przewoźników S. aureus, unikając w ten sposób masowego zatrucia pokarmowego, w wyniku spożycia żywności skażonej enterotoksyną gronkowcową.
Można go również włączyć do wysiewu infekcji ran, posiewów krwi, płynu mózgowo-rdzeniowego, płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, między innymi.
Agar z solonym mannitolem jest przydatny do ponownego izolowania kolonii z hodowli moczu z agaru CLED lub agaru z krwią, w których Gram-dodatnie ziarenkowce ujawniły skupiska..
Sprawdza się również w analizie mikrobiologicznej żywności, wody pitnej, gleb i innych zastosowań..
Po przygotowaniu partii płytek z agarem ze słonym mannitolem zaleca się przeprowadzenie kontroli jakości. Szczepy kontrolne wysiewa się, aby pokazać, czy występuje ich wzrost.
Jako kontrola pozytywna znane szczepy Staphylococcus aureus. Powinien rosnąć zadowalająco, rozwijając żółte kolonie, a podłoże również przybiera ten sam kolor.
Podobnie wygodnie jest włączyć znany szczep Staphylococcus epidermidis. Powinien rosnąć zadowalająco, rozwijając różowe kolonie, a podłoże zachowuje ten sam kolor lub ciemnieje do silniejszego różu.
Jako kontrolę negatywną stosuje się szczepy, które nie powinny rosnąć na tym podłożu. Na przykład znany szczep Escherichia coli lub Klebsiella pneumoniae. Oczekiwanym rezultatem jest całkowite zahamowanie, czyli brak wzrostu..
Dodatkowo niezaszczepiona płytka musi być inkubowana. W nim nie powinno być wzrostu ani zmiany koloru.
Ważne jest, aby płytka nie była używana, jeśli występują oznaki zepsucia, takie jak między innymi zabrudzenie, odwodnienie, przebarwienia.
Używając podłoża agarowego ze słonym mannitolem, należy wziąć pod uwagę kilka ważnych aspektów:
-Uzyskanie wzrostu żółtych kolonii nie oznacza, że tak jest Staphylococcus aureus. Należy pamiętać, że niektóre szczepy Enterococcus są zdolne do wzrostu w tym podłożu i fermentacji mannitolu, a także niektóre pałeczki przetrwalnikujące Gram-dodatnie..
Dlatego ważne jest wykonanie Grama na kolonii i testu na katalazę..
-Z drugiej strony należy wziąć pod uwagę, że inne gatunki Staphylococcus niż aureus są również zdolne do fermentacji mannitolu. Dlatego ważne jest, aby przejść kolonię do bulionu odżywczego, który stamtąd pobrać i wykonać test koagulazy..
Wśród gatunków Staphylococcus o znaczeniu klinicznym dla człowieka, które fermentują mannitol, są: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, pośród innych.
Inni mogą dawać zmienną reakcję, to znaczy czasami pozytywną, a czasami negatywną. Niektóre są S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S.medius, m.in.
-Nie zaleca się pobierania kolonii bezpośrednio z agaru mannitolowego w celu wykonania testu koagulazy, ponieważ wysokie stężenie soli w podłożu może wpływać na wynik..
-Wreszcie, zaleca się inkubację płytek wysianych solonym mannitolem do 48 godzin, ponieważ niektóre szczepy S. aureus może powoli fermentować mannitol, chociaż jest to rzadkie.
Jeszcze bez komentarzy